下调的HDAC9通过抑制骨髓间充质干细胞成骨偶联成血管分化促进激素性股骨头坏死的发生
发布时间：2021-08-31 20:00
目的:探究HDAC9与SONFH的关系,明确下调的HDAC9对SONFH病人来源的BMSCs成骨、成血管及成脂分化能力的影响,为BMSCs治疗SONFH提供新的思路与方法。方法:（1）分离、培养、鉴定SONFH和非SONFH患者来源的BMSCs。（2）用实时荧光定量PCR技术检测两组细胞HDAC9的m RNA表达。（3）应用慢病毒转染BMSCs,下调SONFH来源BMSCs的HDAC9表达,诱导BMSCs成骨、成血管、成脂分化,分别应用茜素红染色、血管形成实验以及油红O染色,检测其成骨、成血管及成脂分化能力,分别检测成骨相关蛋白Runx2、OCN;成血管相关蛋白PDGF-BB、CD31;成脂相关蛋白PPAR-γ含量表达。结果:（1）成功分离、培养BMSCs,细胞贴壁生长并呈长梭形,平行或漩涡状排列聚集,细胞表面分子标记CD29、CD44高表达,CD34、HLA-DR低表达。（2）与非SONFH来源的BMSCs相比,SONFH来源的BMSCs HDAC9 m RNA表达显著降低,差异具有统计学意义（p<0.05）。（3）采用慢病毒转染HDAC9进入SONFH来源的BMSCs后,测得...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SONFH患者来源BMSCs与非SONFH患者来源BMSCs中HDAC9mRNA水平分析
图 3.转染 48 小时后 BMSCs 细胞荧光。5. QRT-PCR 及 Western blot 验证 HDAC9 的表达利用 QRT-PCR 技术检测转染后各组细胞的 HDAC9 表达情况，其结果显示，慢病毒干扰转染组（Lenti-HDAC9 group）HDAC9 的 mRNA 表达明显下调，显著低于空白组（Control group）及慢病毒空载组（Mock-treated group），差异具有统计学意义（p＜0.05），而空白组与慢病毒空载组无明显差异（p＞0.05）（图 4-A）。利用 Western blot 技术检测转染后各组细胞 HDAC9 的蛋白表达情况，其结果表明，慢病毒干扰转染组 HDAC9 的蛋白含量显著低于空白组及慢病毒空载组，差异具有统计学意义（p＜0.05），而空白组与慢病毒空载组无明显差异（p＞0.05）（图 4-B）。以上结果表明，通过慢病毒转染 BMSCs 干预 HDAC9 的表达获得成功。
19图 4. A.病毒转染后三组细胞 HDAC9 mRNA 表达。B.病毒转染后三组细胞 HDAC9蛋白含量。*表示统计学上具有显著差异（p＜0.05）。6. MTT 检测 HDAC9 干扰对 BMSCs 的增殖能力影响利用 MTT 技术检测转染后各组细胞的增殖能力，通过计算不同时间点的吸光度值，发现在不同时间点三组细胞的增殖率均无显著差异（p＞0.05）（图 5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]5’-氮杂胞苷对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞分化作用的实验研究[J]. 莫峰波,杨述华,叶树楠,孙志博. 中国矫形外科杂志. 2015(02)
[2]Molecular mechanisms of mesenchymal stem cell differentiation towards osteoblasts[J]. Maya Fakhry,René Buchet,David Magne,Eva Hamade,Bassam Badran. World Journal of Stem Cells. 2013(04)
[3]微小RNA-451靶向调节钙结合蛋白39对MSCs成骨分化的促进效应[J]. 康夏,康菲,杨波,郭洪峰,权毅,董世武. 中国修复重建外科杂志. 2013(09)
[4]RANK/RANKL/OPG信号通路的研究进展[J]. 王琰,刘超,宋仁纲,张震宇. 医学综述. 2013(07)
博士论文
[1]MiR-708通过靶基因SMAD3抑制间充质干细胞成骨分化并促进激素性股骨头坏死[D]. 郝铖.华中科技大学 2016
[2]HDAC9c调控骨髓间充质干细胞在激素性股骨头坏死中的作用研究[D]. 魏兵.华中科技大学 2014
本文编号：3375526
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SONFH患者来源BMSCs与非SONFH患者来源BMSCs中HDAC9mRNA水平分析
图 3.转染 48 小时后 BMSCs 细胞荧光。5. QRT-PCR 及 Western blot 验证 HDAC9 的表达利用 QRT-PCR 技术检测转染后各组细胞的 HDAC9 表达情况，其结果显示，慢病毒干扰转染组（Lenti-HDAC9 group）HDAC9 的 mRNA 表达明显下调，显著低于空白组（Control group）及慢病毒空载组（Mock-treated group），差异具有统计学意义（p＜0.05），而空白组与慢病毒空载组无明显差异（p＞0.05）（图 4-A）。利用 Western blot 技术检测转染后各组细胞 HDAC9 的蛋白表达情况，其结果表明，慢病毒干扰转染组 HDAC9 的蛋白含量显著低于空白组及慢病毒空载组，差异具有统计学意义（p＜0.05），而空白组与慢病毒空载组无明显差异（p＞0.05）（图 4-B）。以上结果表明，通过慢病毒转染 BMSCs 干预 HDAC9 的表达获得成功。
19图 4. A.病毒转染后三组细胞 HDAC9 mRNA 表达。B.病毒转染后三组细胞 HDAC9蛋白含量。*表示统计学上具有显著差异（p＜0.05）。6. MTT 检测 HDAC9 干扰对 BMSCs 的增殖能力影响利用 MTT 技术检测转染后各组细胞的增殖能力，通过计算不同时间点的吸光度值，发现在不同时间点三组细胞的增殖率均无显著差异（p＞0.05）（图 5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]5’-氮杂胞苷对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞分化作用的实验研究[J]. 莫峰波,杨述华,叶树楠,孙志博. 中国矫形外科杂志. 2015(02)
[2]Molecular mechanisms of mesenchymal stem cell differentiation towards osteoblasts[J]. Maya Fakhry,René Buchet,David Magne,Eva Hamade,Bassam Badran. World Journal of Stem Cells. 2013(04)
[3]微小RNA-451靶向调节钙结合蛋白39对MSCs成骨分化的促进效应[J]. 康夏,康菲,杨波,郭洪峰,权毅,董世武. 中国修复重建外科杂志. 2013(09)
[4]RANK/RANKL/OPG信号通路的研究进展[J]. 王琰,刘超,宋仁纲,张震宇. 医学综述. 2013(07)
博士论文
[1]MiR-708通过靶基因SMAD3抑制间充质干细胞成骨分化并促进激素性股骨头坏死[D]. 郝铖.华中科技大学 2016
[2]HDAC9c调控骨髓间充质干细胞在激素性股骨头坏死中的作用研究[D]. 魏兵.华中科技大学 2014
本文编号：3375526
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3375526.html
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