BMP5促进软骨细胞衰老和凋亡在骨关节炎中的作用及机制研究
发布时间：2021-09-23 16:38
研究背景骨关节炎（Osteoarthritis,OA）是一种最常见的慢性退行性病变,可累及全身多个关节,好发在膝关节,常伴有关节疼痛、活动度减小、关节畸形挛缩等症状。OA一直以来都是研究的热点,但目前仍没有找到有效的靶点进行治疗。目前有大量的研究表明BMP5与OA相关,但其是否在OA的疾病发生发展过程中发挥作用仍值得探讨。研究目的本研究旨在明确BMP5在OA关节软骨组织中表达情况,进而探究BMP5蛋白在OA中对软骨细胞功能的影响,研究BMP5与骨关节炎中关节软骨细胞出现衰老和凋亡之间的关系,深入探讨BMP5与ERK/p38 MAPK信号通路在骨关节炎病程中的作用及其分子机制,为防治骨关节炎提供新的潜在靶点。研究方法本研究在临床上收集OA患者关节软骨标本和正常关节软骨标本、关节液,通过免疫组化、western blot、ELISA实验检测BMP5的表达情况。同时利用c57/BL6小鼠构建DMM-OA骨关节炎模型、年老模型,通过IHC检测BMP5在造模术后2、4周膝关节软骨中的表达情况。利用ATDC5细胞进行体外siRNA转染,敲除BMP5,并利用荧光实时定量（RT-qPCR）和weste...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１正常膝关节示意图??
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第二章ＢＭＰ５通过促进软骨细胞衰老和凋亡加速骨关节炎病程进展??、’气??图２－１临床ＯＡ标本收集７Ｆ：意图。??左图为取下来的膝骨关节炎标本；右图中打孔为膝骨关节炎标本取材位置。??２．２．１．４实验动物与饲养??ＯＡ模型构建、繁殖使用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠均购自南方医科大学实验动物中心。??按照规定的清洁级的级别对小鼠进行饲养管理，每笼３只小鼠，更换垫料并添加??大小动物维持饲料及饮水，每三天进行一次。当小鼠１０周龄的时候认为小鼠己??经成年，可行手术干预。??２．２．２实验方法??２．２．２．１小鼠原代肋软骨细胞提取??选取新出生ｌ－３ｄ的乳鼠，即皮肤还未变黑的乳鼠即可进行取原代。为了避??免细胞出现污染，我们首先将乳鼠放置７５％中的酒精进行消毒１０分钟。接着，??将消毒后的乳鼠置于无菌超净台中泡沫板上，用无菌ｌｍｌ针头固定乳鼠，使用高??压过的眼科剪和眼科镊分离乳鼠背部的皮肤，注意避免触及乳鼠的肺部和腹腔。??当完全分离幵乳鼠背部的皮肤时，暴露出乳鼠胸廓，用眼科镊离断颈部以及脊柱，??再用镊子和剪刀小心分离出肋软骨。将取下来的肋软骨置于基础培养基中培养??ｌＯｍｉｎ。然后在体式显微镜下观察，利用显微剪和显微镊前面取下来浸泡在基础??培养基中的软骨进行粗分（分离软骨和其他显微组织）。最后进行软骨消化，将??粗分后的软骨组织放０．２５％胰酶中，此步能够将附着在软骨的纤维组织分离。３７°Ｃ??细胞消化３０ｍｍ后，再次于体式显微镜下分离肋软骨上附着的肌肉及纤维组织??进行精分，直至可见肋软骨不见其他附着物。??将精分后的软骨组织，放入装有０．１％胶原酶ＩＩ的ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培养集中，??３６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Osteocyte dysfunction promotes osteoarthritis through MMP13-dependent suppression of subchondral bone homeostasis[J]. Courtney M.Mazur,Jonathon J.Woo,Cristal S.Yee,Aaron J.Fields,Claire Acevedo,Karsyn N.Bailey,Serra Kaya,Tristan W.Fowler,Jeffrey C. Lotz,Alexis Dang,Alfred C. Kuo,Thomas P. Vail,Tamara Alliston. Bone Research. 2019(04)
[2]Activation of mTORC1 in subchondral bone preosteoblasts promotes osteoarthritis by stimulating bone sclerosis and secretion of CXCL12[J]. Chuangxin Lin,Liangliang Liu,Chun Zeng,Zhong-Kai Cui,Yuhui Chen,Pinling Lai,Hong Wang,Yan Shao,Haiyan Zhang,Rongkai Zhang,Chang Zhao,Hang Fang,Daozhang Cai,Xiaochun Bai. Bone Research. 2019(01)
[3]The biological function of type I receptors of bone morphogenetic protein in bone[J]. Shuxian Lin,Kathy KH Svoboda,Jian Q Feng,Xinquan Jiang. Bone Research. 2016(02)
本文编号：3406053
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１正常膝关节示意图??
＾?丨?ｃａｌｃｉｆｉｅｄ?ｃａｒｔｉｌａｇｅ??ａｔｔｒｉｔｉｏｎ?Ｖ?／?／?ｋ?一，??Ｃｙｓｔ－ｒｒ?／＞．??＼?＼?／?／?；?Ｍ?ｃａｎｎａｌｉｃｕｌａｒ?ｎｅｔｗｏｒｋ??＼?１?ｆ?／?Ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ?Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｏｓｔｅｏｃｙｔｅ??ｒ?１?＇?ｃｌｕｓｔｅｒ??」?Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ??ｈｙｐ；：／?Ｃｈ°ｎｄ；。印ｅ??Ｎｅｗ?ｂｏｎｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｔ?ｔｈｅ??ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒａｌ?ｊｕｎｃｔｉｏｎ??图１－３晚期骨关节炎结构??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｋｎｅｅ?ｊｏｉｎｔ?ｉｎ?ｌａｔｅ－ｓｔａｇｅ?ＯＡ??３??
第二章ＢＭＰ５通过促进软骨细胞衰老和凋亡加速骨关节炎病程进展??、’气??图２－１临床ＯＡ标本收集７Ｆ：意图。??左图为取下来的膝骨关节炎标本；右图中打孔为膝骨关节炎标本取材位置。??２．２．１．４实验动物与饲养??ＯＡ模型构建、繁殖使用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠均购自南方医科大学实验动物中心。??按照规定的清洁级的级别对小鼠进行饲养管理，每笼３只小鼠，更换垫料并添加??大小动物维持饲料及饮水，每三天进行一次。当小鼠１０周龄的时候认为小鼠己??经成年，可行手术干预。??２．２．２实验方法??２．２．２．１小鼠原代肋软骨细胞提取??选取新出生ｌ－３ｄ的乳鼠，即皮肤还未变黑的乳鼠即可进行取原代。为了避??免细胞出现污染，我们首先将乳鼠放置７５％中的酒精进行消毒１０分钟。接着，??将消毒后的乳鼠置于无菌超净台中泡沫板上，用无菌ｌｍｌ针头固定乳鼠，使用高??压过的眼科剪和眼科镊分离乳鼠背部的皮肤，注意避免触及乳鼠的肺部和腹腔。??当完全分离幵乳鼠背部的皮肤时，暴露出乳鼠胸廓，用眼科镊离断颈部以及脊柱，??再用镊子和剪刀小心分离出肋软骨。将取下来的肋软骨置于基础培养基中培养??ｌＯｍｉｎ。然后在体式显微镜下观察，利用显微剪和显微镊前面取下来浸泡在基础??培养基中的软骨进行粗分（分离软骨和其他显微组织）。最后进行软骨消化，将??粗分后的软骨组织放０．２５％胰酶中，此步能够将附着在软骨的纤维组织分离。３７°Ｃ??细胞消化３０ｍｍ后，再次于体式显微镜下分离肋软骨上附着的肌肉及纤维组织??进行精分，直至可见肋软骨不见其他附着物。??将精分后的软骨组织，放入装有０．１％胶原酶ＩＩ的ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培养集中，??３６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Osteocyte dysfunction promotes osteoarthritis through MMP13-dependent suppression of subchondral bone homeostasis[J]. Courtney M.Mazur,Jonathon J.Woo,Cristal S.Yee,Aaron J.Fields,Claire Acevedo,Karsyn N.Bailey,Serra Kaya,Tristan W.Fowler,Jeffrey C. Lotz,Alexis Dang,Alfred C. Kuo,Thomas P. Vail,Tamara Alliston. Bone Research. 2019(04)
[2]Activation of mTORC1 in subchondral bone preosteoblasts promotes osteoarthritis by stimulating bone sclerosis and secretion of CXCL12[J]. Chuangxin Lin,Liangliang Liu,Chun Zeng,Zhong-Kai Cui,Yuhui Chen,Pinling Lai,Hong Wang,Yan Shao,Haiyan Zhang,Rongkai Zhang,Chang Zhao,Hang Fang,Daozhang Cai,Xiaochun Bai. Bone Research. 2019(01)
[3]The biological function of type I receptors of bone morphogenetic protein in bone[J]. Shuxian Lin,Kathy KH Svoboda,Jian Q Feng,Xinquan Jiang. Bone Research. 2016(02)
本文编号：3406053
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