通过抑制BMSCs中转录因子LEF1的表达促进肩袖腱骨愈合的研究

发布时间：2021-10-01 05:32

　　研究背景肩袖损伤是目前肩关节疼痛并影响正常活动的主要原因之一。目前对于肩袖损伤治疗的最佳方法是进行关节镜下手术修补。但是由于肩袖解剖结构的特殊性,其腱骨界面（bone-tendon junction,BTJ）愈合的情况决定了患者的预后。目前的研究显示,外科术后的腱骨愈合一般是以瘢痕愈合的方式进行的,难以达到肩袖原本的生理结构愈合。这种由瘢痕形成的愈合方式使得肩袖组织的生物力学强度明显弱于正常结构,成为患者术后早期进行功能锻炼的障碍,并且可能增加远期肩袖发生再次损伤的概率。LEF1是Wnt通路中重要的转录因子,是TCF/LEF转录因子家族中的成员,对Wnt通路调控细胞分化有着重要作用,并且能够影响其他信号通路。因此,本研究拟1.提取SD大鼠骨髓间充质干细胞（Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）,利用慢病毒转染抑制LEF1表达,研究转录因子LEF1对其诱导向软骨细胞分化的作用;2.建立SD大鼠冈上肌腱损伤修复模型,利用能够抑制LEF1的慢病毒感染SD大鼠BMSCs,将混有转染后BMSCs的明胶海绵缝入BTJ,观察术后腱骨愈合部位的组织变化情况,观察该转录因子... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

种siR入A的抑制效率检测

感染 48 小时后采用 RT-PCR 检测细胞内 LEF1 基因的抑制水平。结果显示（图2），慢病毒能够抑制 LEF1 的表达，抑制效率约为 64.3%，认为符合前期实验结果，将 LEF1 siRNA-1 序列用于下一步的实验。5、SD 大鼠 BMSCs 转染慢病毒后分化方向检测在慢病毒转染完成 48 小时后，消化细胞并提取细胞总蛋白及 RNA，利用 Western-Bolt 和 PCR 检测细胞内 Sox9 的表达情况，并以未转染细胞进行对照。结果如下（图3、图 4），转染后细胞内的 Sox9 的表达高于未转染的 BMSCs（*p<0.05），表明抑制LEF1 将使 Sox9 的表达上调，可使 BMSCs 趋向成软骨细胞分化。图 2 LEF1 siRNA-1 的慢病毒抑制效率验证

感染 48 小时后采用 RT-PCR 检测细胞内 LEF1 基因的抑制水平。结果显示（图2），慢病毒能够抑制 LEF1 的表达，抑制效率约为 64.3%，认为符合前期实验结果，将 LEF1 siRNA-1 序列用于下一步的实验。5、SD 大鼠 BMSCs 转染慢病毒后分化方向检测在慢病毒转染完成 48 小时后，消化细胞并提取细胞总蛋白及 RNA，利用 Western-Bolt 和 PCR 检测细胞内 Sox9 的表达情况，并以未转染细胞进行对照。结果如下（图3、图 4），转染后细胞内的 Sox9 的表达高于未转染的 BMSCs（*p<0.05），表明抑制LEF1 将使 Sox9 的表达上调，可使 BMSCs 趋向成软骨细胞分化。图 2 LEF1 siRNA-1 的慢病毒抑制效率验证

【参考文献】：
期刊论文
[1]Rotator cuff tears: An evidence based approach[J]. Senthil Nathan Sambandam,Vishesh Khanna,Arif Gul,Varatharaj Mounasamy.  World Journal of Orthopedics. 2015(11)



本文编号：3417254