线粒体途径在利多卡因诱导人骨肉瘤细胞凋亡及其机制研究

发布时间：2021-10-12 03:06

　　第一部分利多卡因对骨肉瘤细胞活性的影响及其机制研究目的:评估局麻药利多卡因在体外对骨肉瘤细胞活性的影响及可能的凋亡途径。方法:取生长状态良好的人骨肉瘤细胞（HOS/MNNG,MG63,U2OS）,药物处理前将细胞以每孔1*104个接种在96孔培养板中,24小时后,在培养板中加入含不同浓度的利多卡因的培养基,对照组加入相等容积的DEPC水,分别继续培养24h,48h,72h后,用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测试剂盒检测细胞活性,使用流式细胞仪检测细胞周期,用JC-1法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关蛋白和线粒体途径关键蛋白的表达。结果:局麻药利多卡因以时间依赖性和剂量依赖性的形式降低骨肉瘤细胞的活性,且4m M浓度的利多卡因较明显,药物处理细胞后,细胞周期停滞,线粒体膜电位下降,促凋亡蛋白BAX表达量增加,抑凋亡蛋白BCL-2表达量下降,线粒体途径相关蛋白细胞色素C（Cyt-c）和Cleaved-Caspase 3,Caspase 9表达量也增加。结论:利多卡因对骨肉瘤细胞的毒性作用具有明显的剂量和时间依赖性,且通过线粒体凋亡途径导致细胞凋亡。第二部分利多... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

利多卡因化学结构示意图

位于线粒体内外膜之间，并与内膜相连。当细胞色素 C 被时放入细胞之后，会激活下游的 Caspas酶原，而活化的 Caspase-3 作为效应因子，将作用于不同的下有靶点，最后经蛋白质的水解作用致细胞凋亡[31-34]。我们的研究结果也证实了利多卡因对骨肉瘤细胞系的抗肿瘤特性，当实验浓度达到 4mM 以时，利多卡因的对肿瘤细胞的细胞毒性越来越明显，且随着药物干预时间的延长，其毒性效果越来越强，其表现为细胞活性的下降，细胞周期的抑制，和凋亡细胞的增加，这都提示了利多因对肿瘤细胞毒性的剂量依赖性和时间依赖性。另外我们的结果还表明，利多卡因产生的细胞亡，其可能由线粒体途径介导的凋亡有关，表现为细胞线粒体膜电位的下降，Cyt-C，CaspaseCleaved-Caspase 3 表达增加，蛋白 BAX/BCL-2 比例上升。根据以上假设和实验结果，我们推测在用利多卡因干预培养细胞后，肿瘤细胞的线粒体膜电位下降，导致线粒体通透性增加，线粒空隙增加，促凋亡蛋白和 Cyt-c 释放，激活 Caspase 9 激活，并随之激活 Caspase 3，最终导致胞水解凋亡，但其中是否还存在其他机制还需进一步研究。附 图

不同浓度利多卡因对3种骨肉瘤细胞凋亡的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文编号：3431766