沉默肌腱干细胞TGIF1基因促进腱骨愈合的相关研究

发布时间：2017-05-04 10:08

  本文关键词：沉默肌腱干细胞TGIF1基因促进腱骨愈合的相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的腱骨连接处是结缔组织中的特殊形式,损伤之后很难形成纤维软骨层,愈合能力较差。TGFβ在不同的阶段通过不同的信号通路可产生双向作用(成肌腱或成软骨)。研究显示TGIF1可抑制TGFβ通路下游软骨基因的表达。肌腱干细胞作为新发现的干细胞,具有更强多向分化能力。本研究以肌腱干细胞为种子细胞,探讨沉默肌腱干细胞中转录生长因子影响因子1(TGIF1)对腱骨损伤的促进作用。方法1从SD大鼠跟腱中分离、培养肌腱干细胞,并对其进行鉴定,进行成骨、成软骨及成脂诱导,观察肌腱来源干细胞的克隆、增殖能力及多向分化的能力。2利用沉默或过表达TGIF1基因的肌腱干细胞进行成软骨诱导,观察各组成软骨分化的能力。在成软骨诱导后的3天、7天及21天对细胞微团进行定量PCR及Western blotting检测,观察软骨及肌腱相关标记基因的表达情况。3将64只成年SD大鼠随机4组,分别为纤维蛋白+肌腱干细胞沉默TGIF1组,纤维蛋白+肌腱干细胞过表达TGIF1组,纤维蛋白+肌腱干细胞组和仅含纤维蛋白组。显露并切断大鼠冈上肌在肱骨大结节正常的插入点,去除插入点原有的纤维软骨,在肌腱干细胞组注射1×106 TDSCs+纤维蛋白胶,仅含纤维蛋白组植入纤维蛋白胶,肌腱干细胞沉默TGIF1组注入1×106沉默TGIF1基因的肌腱干细胞+纤维蛋白胶,肌腱干细胞过表达TGIF1组植入1×106过表达TGIF1基因的肌腱干细胞+纤维蛋白胶。分别在术2周和4周取材进行组织学研究,评估腱骨平面的愈合情况。结果1大鼠跟腱分离的TDSCs经分离培养后具有较强的增殖能力,表面特异性抗原CD90阳性,CD73阳性,而CD34为阴性表达,多向分化实验显示TDSCs具有成骨、成软骨及成脂肪分化的能力。2沉默或过表达肌腱干细胞TGIF1基因进行成软骨分化,结果显示沉默TGIF1基因的肌腱干细胞成软骨能力增强,而过表达TGIF1基因的肌腱干细胞成软骨能力减弱。3通过免疫共沉淀的方法发现TGIF1能够结合Smad2,抑制Smad2的磷酸化。4纤维蛋白+肌腱干细胞沉默TGIF1组术后2周在腱骨界面之间出现软骨细胞纤维软骨,术后4周腱骨界面纤维软骨较其他各组明显,且可见较多排列有序的胶原纤维,而纤维蛋白+肌腱干细胞过表达TGIF1组和仅含纤维蛋白组中腱骨连接处瘢痕组织明显。在肌腱干细胞组中含有少量的纤维软骨和瘢痕组织。Western blotting检测纤维蛋白+肌腱干细胞沉默TGIF1组蛋白裂解物中软骨相关蛋白较其他组多。结论这个研究显示沉默肌腱干细胞中TGIF1的表达可以促进腱骨连接面损伤的愈合。
【关键词】：肌腱干细胞 转录生长因子影响因子-1 腱骨愈合
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R68
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 第一部分 肌腱干细胞的提取、鉴别及多向分化的相关研究12-22
• 2 材料与方法12-18
• 3 结果18-21
• 4 讨论21-22
• 第二部分 调控肌腱干细胞TGIF1 表达对腱骨愈合的实验研究22-42
• 2 材料与方法22-31
• 3 结果31-39
• 4 讨论39-42
• 结论42
• 参考文献42-49
• 附录49-51
• 致谢51-52
• 综述52-60
• 参考文献56-60

【参考文献】

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1 秦朗;;运动员急性运动损伤调查及影响因素分析[J];现代预防医学;2011年09期

  本文关键词：沉默肌腱干细胞TGIF1基因促进腱骨愈合的相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：344862