促肝细胞生长素对大鼠入肝血流阻断后肝细胞的保护作用机制初步研究
发布时间：2021-10-22 18:38
目的:通过建立靶向线粒体转录因子A（Mitochondrial Transcription Factor A,TFAM）和核呼吸因子1（Nuclear Respiratory Factor-1,NRF-1）的基因沉默（RNA interference,RNAi）大鼠入肝血流阻断模型,观察促肝细胞生长素（Promoting Hepatocyte Growth Factor,PHGF）在RNAi大鼠肝细胞内是否有保护作用,初步研究PHGF是否通过调控TFAM和/或NRF-1影响线粒体DNA（Mitochondrial DNA,mtDNA）合成,进而保护肝细胞线粒体功能。方法:第一步建立靶向NRF-1和TFAM的RNAi大鼠模型。设计RNAi模板序列,采用化学合成的方法合成小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）;利用lipofectamin2000转染siRNA至HSC-T6细胞,利用Real Time PCR及Western blot检测RNAi效果,根据结果筛选出最佳干扰效果siRNA;将最佳抑制活性的RNAi序列进行慢病毒包装;将慢病毒颗粒经大鼠尾静脉注...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
siRNA转染后HSC-T6细胞后荧光显微镜下观察情况（标尺=100μm）
2.1.5 两条有效干扰序列进行慢病毒包装成功后，进行大鼠活体RNAi实验，病毒感染大鼠肝脏后，取新鲜肝脏组织做冰冻病理切片，荧光显微镜下观察到肝组织中存在带绿色荧光慢病毒（图6）。图6 肝组织感染慢病毒后可见绿色荧光（×200）2.1.6 RT-PCR检测靶基因相对表达量（表11、表12）：LV3-TFAM组、LV3-NRF-1组与阴性病毒对照组及正常细胞对照组相比，靶基因相对表达量显著下降，阴性对照与正常对照组无差异，病毒有效，大鼠活体RNAi成功。表11 大鼠肝组织TFAM mRNA相对表达量( x s，n=6)组别 靶基因average Ct β-actin average Ct 靶基因相对表达量LV3-TFAM组 21.21±0.26 15.61±0.09 0.41(0.33-0.49)*LV3-NC组 20.13±0. 24 15.73±0.21 0.93(0.75-1.16)CON组 20.15±0.18 15.85±0.13 1(0.86-1.16)注：靶基因相对表达量用2-ΔΔCt值表示，*与CON组比较， P＜0.05;
遵义医科大学硕士学位论文 罗燕青27图7 大鼠肝组织HE染色结果（200×）注：各图所代表具体分组见下表所示：SD大鼠 靶向TFAM的RNAi大鼠 靶向NRF-1的RNAi大鼠实验组 对照组 实验组 对照组 实验组 对照组术后第1d a b c d e f术后第7d g h i j k l2.3 肝功能检测情况：术后1d各组肝功能均明显损害，ALT、AST、TB升高， 其中基因沉默组大鼠（B组、C组）较正常组大鼠（A组）ALT、AST、TB值更高，实验组与对照组间无明显差别；术后各组大鼠肝功能ALT、AST、TB值均有下降，术后第7d，实验组较对照组ALT、AST、TB值下降更明显。g h ij k l
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝脏缺血再灌注损伤分子机制的研究进展[J]. 赖金惠,刘忠忠,李玲,钟自彪,叶少军,王彦峰,叶啟发. 中华移植杂志(电子版). 2018(04)
[2]乌司他丁联合缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响[J]. 陈宝鹤,李文美. 临床肝胆病杂志. 2018(02)
[3]促肝细胞生长素对百草枯中毒引起大鼠急性肺损伤的影响[J]. 颜丽萍,凌顺,李弘,喻晓东,苏林,石晓萍,陈依鸽,闫玉栋. 中国医药导报. 2017(12)
[4]肝脏缺血再灌注损伤机制的研究进展[J]. 关连越,付佩尧,李巍. 中国实验诊断学. 2015(09)
[5]Molecular mechanisms of liver ischemia reperfusion injury:Insights from transgenic knockout models[J]. Gourab Datta,Barry J Fuller,Brian R Davidson. World Journal of Gastroenterology. 2013(11)
[6]肝脏缺血再灌注损伤发生机制及药物干预研究进展[J]. 倪敏,沈甫明. 药学实践杂志. 2011(03)
[7]Methods of vascular control technique during liver resection:a comprehensive review[J]. Wan-Yee Lau,Eric C.H.Lai,Stephanie H.Y.Lau. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2010(05)
[8]Ischemic post-conditioning to counteract intestinal ischemia/reperfusion injury[J]. Timothy A Pritts,Marshall H Montrose. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2010(04)
[9]Protective effects of ischemic preconditioning and application of lipoic acid prior to 90 min of hepatic ischemia in a rat model[J]. Friedrich Duenschede,Kirsten Erbes,Nina Riegler,Patrick Ewald,Achim Kircher,Stefanie Westermann,Arno Schad,Imke Miesmer,Simon Albrecht-Schck,Ines Gockel,Alexandra K Kiemer,Theodor Junginger. World Journal of Gastroenterology. 2007(27)
[10]门静脉转流下大鼠门静脉缺血对肝脏能量代谢的影响[J]. 冯春林,别平,林恒,谭轶峰,黄波,李昆. 中华消化外科杂志. 2007 (04)
本文编号：3451653
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
siRNA转染后HSC-T6细胞后荧光显微镜下观察情况（标尺=100μm）
2.1.5 两条有效干扰序列进行慢病毒包装成功后，进行大鼠活体RNAi实验，病毒感染大鼠肝脏后，取新鲜肝脏组织做冰冻病理切片，荧光显微镜下观察到肝组织中存在带绿色荧光慢病毒（图6）。图6 肝组织感染慢病毒后可见绿色荧光（×200）2.1.6 RT-PCR检测靶基因相对表达量（表11、表12）：LV3-TFAM组、LV3-NRF-1组与阴性病毒对照组及正常细胞对照组相比，靶基因相对表达量显著下降，阴性对照与正常对照组无差异，病毒有效，大鼠活体RNAi成功。表11 大鼠肝组织TFAM mRNA相对表达量( x s，n=6)组别 靶基因average Ct β-actin average Ct 靶基因相对表达量LV3-TFAM组 21.21±0.26 15.61±0.09 0.41(0.33-0.49)*LV3-NC组 20.13±0. 24 15.73±0.21 0.93(0.75-1.16)CON组 20.15±0.18 15.85±0.13 1(0.86-1.16)注：靶基因相对表达量用2-ΔΔCt值表示，*与CON组比较， P＜0.05;
遵义医科大学硕士学位论文 罗燕青27图7 大鼠肝组织HE染色结果（200×）注：各图所代表具体分组见下表所示：SD大鼠 靶向TFAM的RNAi大鼠 靶向NRF-1的RNAi大鼠实验组 对照组 实验组 对照组 实验组 对照组术后第1d a b c d e f术后第7d g h i j k l2.3 肝功能检测情况：术后1d各组肝功能均明显损害，ALT、AST、TB升高， 其中基因沉默组大鼠（B组、C组）较正常组大鼠（A组）ALT、AST、TB值更高，实验组与对照组间无明显差别；术后各组大鼠肝功能ALT、AST、TB值均有下降，术后第7d，实验组较对照组ALT、AST、TB值下降更明显。g h ij k l
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝脏缺血再灌注损伤分子机制的研究进展[J]. 赖金惠,刘忠忠,李玲,钟自彪,叶少军,王彦峰,叶啟发. 中华移植杂志(电子版). 2018(04)
[2]乌司他丁联合缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响[J]. 陈宝鹤,李文美. 临床肝胆病杂志. 2018(02)
[3]促肝细胞生长素对百草枯中毒引起大鼠急性肺损伤的影响[J]. 颜丽萍,凌顺,李弘,喻晓东,苏林,石晓萍,陈依鸽,闫玉栋. 中国医药导报. 2017(12)
[4]肝脏缺血再灌注损伤机制的研究进展[J]. 关连越,付佩尧,李巍. 中国实验诊断学. 2015(09)
[5]Molecular mechanisms of liver ischemia reperfusion injury:Insights from transgenic knockout models[J]. Gourab Datta,Barry J Fuller,Brian R Davidson. World Journal of Gastroenterology. 2013(11)
[6]肝脏缺血再灌注损伤发生机制及药物干预研究进展[J]. 倪敏,沈甫明. 药学实践杂志. 2011(03)
[7]Methods of vascular control technique during liver resection:a comprehensive review[J]. Wan-Yee Lau,Eric C.H.Lai,Stephanie H.Y.Lau. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2010(05)
[8]Ischemic post-conditioning to counteract intestinal ischemia/reperfusion injury[J]. Timothy A Pritts,Marshall H Montrose. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2010(04)
[9]Protective effects of ischemic preconditioning and application of lipoic acid prior to 90 min of hepatic ischemia in a rat model[J]. Friedrich Duenschede,Kirsten Erbes,Nina Riegler,Patrick Ewald,Achim Kircher,Stefanie Westermann,Arno Schad,Imke Miesmer,Simon Albrecht-Schck,Ines Gockel,Alexandra K Kiemer,Theodor Junginger. World Journal of Gastroenterology. 2007(27)
[10]门静脉转流下大鼠门静脉缺血对肝脏能量代谢的影响[J]. 冯春林,别平,林恒,谭轶峰,黄波,李昆. 中华消化外科杂志. 2007 (04)
本文编号：3451653
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3451653.html
最近更新
教材专著
