激活素A对小鼠乳腺癌4T1细胞体外迁移及体内转移的影响
发布时间：2021-10-22 23:54
乳腺癌是威胁女性健康的最常见肿瘤之一,导致乳腺癌患者死亡的主要原因是肿瘤转移。恶性肿瘤转移涉及原发癌生长、肿瘤细胞脱落、侵入基质或侵入脉管系统、形成癌栓、继发组织器官定位生长等多个环节。三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）是一种高转移性、侵袭性、复发性的乳腺癌型,大约10%20%的乳腺癌病例属于三阴性表型,因此,控制乳腺癌细胞转移是其治疗的关键。激活素A（activin A,Act A）属于转化生长因子β（transforming growth factorβ,TGF-β）超家族成员,参与多种肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移调控。课题组前期研究发现,激活素A可以促进体外培养人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞迁移,但激活素A对三阴性乳腺癌在体内生长及转移的影响仍未阐明。因此,本研究选取小鼠三阴性乳腺癌细胞系4T1细胞,利用原位乳腺癌移植瘤模型鼠,探讨激活素A对4T1细胞体外迁移及体内转移的影响,为进一步寻找调控乳腺癌细胞转移的治疗靶点提供研究依据。一、研究方法1.采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked im...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠乳腺癌细胞系4T1细胞表达激活素AA.RT-PCR检测ActivinβA、Smad2、Smad3、Smad4、ActRⅡA及ActRⅡBmRNA在4T1细胞中的转录水平；B.ELISA法检测4T1细胞培养上清中激活素A蛋白水平（n=6）
第3章实验结果21系4T1细胞24h和48h后，4T1细胞的活力均随激活素A剂量的增加而增强（图3.2），激活素A浓度为20ng/mL时，与培养液对照组比较差异显著（p<0.01）。图3.2激活素A促进4T1细胞活力A.MTT法检测4T1细胞在激活素A刺激24h后的细胞活力；B.MTT法检测4T1细胞在激活素A刺激48h后的细胞活力。Control:单纯培养液组；ACT1.25:激活素A1.25ng/mL；ACT5:激活素A5ng/mL；ACT20:激活素A20ng/mL。n=6，*p<0.05，**p<0.01。3.3激活素A对4T1细胞增殖的影响实验采用BrdU法检测DNA复制活跃的细胞，探讨激活素A对4T1细胞增殖的作用。结果显示，激活素A对4T1细胞增殖无明显影响，p＞0.05（图3.3A）；采用RTCA技术进一步分析4T1细胞增殖，将4T1细胞加入E16xCELLigence板2h后，再加入激活素A（20ng/mL），每隔5min记录细胞指数（CI），结果显示，与单纯培养液对照组相比，激活素A不影响4T1细胞的增殖，p＞0.05，无显著统计学差异（图3.3B），该结果与BrdU法检测4T1细胞增殖结果一致。
第3章实验结果22图3.3激活素A不影响4T1细胞增殖A.BrdU法检测激活素A对4T1细胞增殖的影响；B.RTCA检测激活素A对4T1细胞增殖的影响。Control:单纯培养液组；ACT1.25:激活素A1.25ng/mL；ACT5:激活素A5ng/mL；ACT20:激活素A20ng/mL。n=6。3.4激活素A对4T1细胞凋亡的影响上述实验结果显示，激活素A可以促进4T1细胞的细胞活力，但不影响其细胞增殖，因此，实验进一步采用AnnexinV-FITC和7-AAD双染色，流式细胞术检测激活素A预处理12h的4T1细胞凋亡率。结果显示，激活素A可以抑制4T1细胞凋亡，并且随着激活素A浓度升高，对4T1细胞凋亡的抑制作用越明显（图3.4）。
本文编号：3452062
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠乳腺癌细胞系4T1细胞表达激活素AA.RT-PCR检测ActivinβA、Smad2、Smad3、Smad4、ActRⅡA及ActRⅡBmRNA在4T1细胞中的转录水平；B.ELISA法检测4T1细胞培养上清中激活素A蛋白水平（n=6）
第3章实验结果21系4T1细胞24h和48h后，4T1细胞的活力均随激活素A剂量的增加而增强（图3.2），激活素A浓度为20ng/mL时，与培养液对照组比较差异显著（p<0.01）。图3.2激活素A促进4T1细胞活力A.MTT法检测4T1细胞在激活素A刺激24h后的细胞活力；B.MTT法检测4T1细胞在激活素A刺激48h后的细胞活力。Control:单纯培养液组；ACT1.25:激活素A1.25ng/mL；ACT5:激活素A5ng/mL；ACT20:激活素A20ng/mL。n=6，*p<0.05，**p<0.01。3.3激活素A对4T1细胞增殖的影响实验采用BrdU法检测DNA复制活跃的细胞，探讨激活素A对4T1细胞增殖的作用。结果显示，激活素A对4T1细胞增殖无明显影响，p＞0.05（图3.3A）；采用RTCA技术进一步分析4T1细胞增殖，将4T1细胞加入E16xCELLigence板2h后，再加入激活素A（20ng/mL），每隔5min记录细胞指数（CI），结果显示，与单纯培养液对照组相比，激活素A不影响4T1细胞的增殖，p＞0.05，无显著统计学差异（图3.3B），该结果与BrdU法检测4T1细胞增殖结果一致。
第3章实验结果22图3.3激活素A不影响4T1细胞增殖A.BrdU法检测激活素A对4T1细胞增殖的影响；B.RTCA检测激活素A对4T1细胞增殖的影响。Control:单纯培养液组；ACT1.25:激活素A1.25ng/mL；ACT5:激活素A5ng/mL；ACT20:激活素A20ng/mL。n=6。3.4激活素A对4T1细胞凋亡的影响上述实验结果显示，激活素A可以促进4T1细胞的细胞活力，但不影响其细胞增殖，因此，实验进一步采用AnnexinV-FITC和7-AAD双染色，流式细胞术检测激活素A预处理12h的4T1细胞凋亡率。结果显示，激活素A可以抑制4T1细胞凋亡，并且随着激活素A浓度升高，对4T1细胞凋亡的抑制作用越明显（图3.4）。
本文编号：3452062
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