RNF165在乳腺癌中的功能研究

发布时间：2021-10-30 04:29

　　[目 的]明确新近发现的E3泛素连接酶RNF165基因在乳腺癌的表达和功能,为乳腺癌防治奠定基础。[方法]1、运用Ualcan和BCIP数据库对RNF165在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌患者预后关系进行初步分析。2、利用从2株人永生化乳腺上皮细胞和12株人乳腺癌细胞中提取的RNA进行逆转录,通过qPCR检测乳腺癌细胞中RNF165在mRNA水平的表达。3、构建RNF165野生型（RNF165WT）及其酶活突变体RNF165C294/297A 和 RNF165M313A 质粒,制备慢病毒。4、利用HCC1806和MDA-MB-231乳腺癌细胞构建稳定过表达RNF165WT 和其酶活突变体 RNF165C294/297A、RNF165M313A 的稳转细胞株5、在稳定表达RNF165WT及其酶活突变体RNF165C294/297A和RNF165M313A的HCC1806和MDA-MB-231乳腺癌细胞中进行SRB实验、细胞划痕实验、Tanswell实验和流式细胞术,检测过表达RNF165对细胞生长、迁移、侵袭和周期的影响。[结 果]1、Ualcan数据库分析显示RNF165 mRNA在乳腺原... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＲＮＦ１６５在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌患者预后关系

１．２?ＲＮＦ１６５?ｍＲＮＡ在乳腺癌细胞中主要呈低表达??鉴于数据库信息提示ＲＮＦ１６５在乳腺癌中可能扮演抑癌基因的角色，我们进一??步在乳腺癌细胞中检测了?ＲＮＦ１６５的表达。因为ＲＮＦ１６５抗体检测内源ＲＮＦ１６５蛋??白表达的效果不好，我们通过ｑＰＣＲ检测了?ＲＮＦ１６５?ｍＲＮＡ在乳腺癌细胞中的相对??表达量，结果提示ＲＮＦ１６５在人乳腺细胞中ｍＲＮＡ水平的表达（获得的实验数据??先标准化至内参ＧＡＰＤＨ，再以ＭＣＦ１０Ａ作为对照）以相对正常的乳腺上皮细胞??ＭＣＦ１０Ａ、１８４Ｂ５?和乳腺癌细胞?ＨＣＣ１５００?相对较高，而在?ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＳ５７８Ｔ、??Ｔ４７Ｄ和ＳＫ－ＢＲ－３乳腺癌细胞中未检测到ｍＲＮＡ水平的表达，在其余７株乳腺癌??细胞中表达相对较低（图２）。??６－??〇??Ｉ?Ａ??＾?４－??Ｚ?Ｉ??ＣＣ．?Ｍ??Ｅ?ｉ?ａ??５８?２．?１?Ｅ??图２?ＲＮＦ１６５在人乳腺癌细胞中ｍＲＮＡ水平的相对表达量。共收集了?１４株人乳腺细胞，包??括２株永生化的乳腺上皮细胞和１２株乳腺癌细胞，提取其ＲＮＡ，经逆转录获得ｃＤＮＡ，再??以ｃＤＮＡ为模板进行ｑＰＣＲ检测ＲＮＦ１６５?ｍＲＮＡ水平的相对表达量。??２?ＲＮＦ１６５在乳腺癌中的功能??为了明确ＲＮＦ１６５在乳腺癌中的功能，我们构建了?ＰＣＤＨ－ＲＮＦ１６５ＷＴ表达??质粒，因为ＲＮＦ１６５是一个Ｅ３泛素连接酶，其发挥功能可能是依赖其Ｅ３泛素??２８??

?Ｗ?？＞??＾?Ｎ?＇?＾?Ｖ?＾?—??Ｄａｙ＊??Ｃ?Ｄ??ＨＣＣ１８０６?ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??＿?Ｒ＾１６５Ｍ３１３Ａ?Ｗ?—?ＲＮＦ１８５Ｍ３１３Ａ??９－?ｉ?ＲＮＦ１６５ＷＴ?４０－?—?ＲＮＦ１０５ＷＴ??３?３０?／?—?ＰＣＯＨ?５?＾?—?ＰＣＯＨ??卜?ｆ：?Ｘ??〇］?．?—．?．?．?ｒ—?〇?？?＂Ｔ?￣．?．?．?．—??＾?＼?＊Ｖ?Ｖ?ｔ＞?＾?Ｎ?＊Ｖ??Ｄａｙｓ?Ｄａｙｓ??图４过表达ＲＮＦ１６５ＷＴ能够抑制乳腺癌细胞ＨＣＣ１８０６和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１的生长。（Ａ和Ｂ）??稳定过表达ＲＮＦ１６５ＷＴ和酶活突变体ＲＮＦ１６５Ｃ２９４／２９７Ａ对细胞生长的影响。（Ｃ和Ｄ）稳??定过表达ＲＮＦ１６５ＷＴ和酶活突变体ＲＮＦ１６５Ｍ３１３Ａ对细胞生长的影响。将稳定过表达??ＲＮＦ１６５ＷＴ?组、ＲＮＦ１６５Ｃ２９４／２９７Ａ?组、ＲＮＦ１６５Ｍ３１３Ａ?组和?ＰＣＤＨ?对照组的?ＨＣＣ１８０６??（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）细胞等量接种于４８孔板，每组细胞每个时间点铺３个复孔，分别于铺板??３０??


本文编号：3466050