下调PKM2表达对骨肉瘤细胞增殖与侵袭的影响

发布时间：2021-10-31 23:31

　　目的:从细胞水平探讨PKM2表达对骨肉瘤细胞增殖与侵袭的影响,挖掘PKM2在骨肉瘤早期诊断、治疗靶点和预后评估的价值。方法:1.通过Lipofectamine2000将含有PKM2靶向序列的si RNA瞬时转染骨肉瘤MG63细胞为实验组,正常培养的MG63细胞和转染无关序列的MG63细胞为对照组。2.通过Western blot技术检测PKM2的表达变化。3.CCK-8实验、平板克隆实验检测下调PKM2表达后对骨肉瘤细胞MG63增殖能力的影响。4.Transwell实验检测下调PKM2后对骨肉瘤细胞MG63侵袭能力的影响。结果:1.转染si RNA-PKM2的骨肉瘤MG63细胞中PKM2的表达降低,与正常培养的细胞对照组和转染无关序列的对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。2.CCK-8增殖试验中,在48h和72h,转染si RNA-PKM2的MG63细胞的吸光度值显著低于对照组（P<0.05）。3.平板克隆实验中,转染si RNA-PKM2的MG63细胞的克隆计数为79.34±5.01个,显著少于对照组（P<0.05）。4、Transwell实验中,转染si... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

肿瘤的十大特征

estern blot 检测 siRNA-PKM2 干扰后 MG63 中 PK siRNA-PKM2 瞬时转染 MG63 细胞后，通过 Western blo化。结果显示，si609 组 PKM2 蛋白表达量为 0.34±0.01，细胞对照组）和 NC 组（转染 siRNA-scramble 无关序列对差异（P＜0.05），而 KB 组和 NC 组之间无统计学差异（相比，siRNA-PKM2干扰后PKM2表达降低（表1，图2）。说染 MG63 细胞，同时下调了 PKM2 的表达，且干扰效果表 1 si RNA 干扰后骨肉瘤细胞 MG63 中 PKM2 的表达改变相对值1 2 3B 组 1.00 1.00 1.00 C 组 0.98 0.98 1.00 09 组 0.33 0.33 0.35

CK-8 实验检测下调 PKM2 表达对 MG63 增殖的影响过 CCK-8 实验检测下调 PKM2 表达对骨肉瘤细胞 MG63 增殖的影时间延长，si609 组的吸光度逐渐降低，而 KB 组（正常培养的细 NC 组（转染 siRNA-scramble 无关序列对照组）的吸光度均上升，si609 组与 KB 组、NC 组的吸光度差异均有统计学意义（P＜0.05）。说明下调 PKM2 表达后，骨肉瘤细胞的增殖能力显著下降。表 2 siRNA-PKM2 干扰后骨肉瘤细胞 MG63 的增殖结果吸光度比较KB 组 NC 组 si609 组 P4h 1.11±0.01 1.10±0.02 1.08±0.05 0.548h 1.26±0.01 1.17±0.11 0.92±0.01*# 0.002h 1.55±0.06 1.35±0.08* 0.82±0.02*# <0.0

【参考文献】：
期刊论文
[1]Tumor pyruvate kinase M2:A promising molecular target of gastrointestinal cancer[J]. Chen Guo,Guan Li,Jianing Hou,Xingming Deng,Sheng Ao,Zhuofei Li,Guoqing Lyu.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(06)
[2]脂质体介导转染犬肾上皮细胞的方法改进与优化[J]. 柴百惠,绳秀珍,唐小千,邢婧,战文斌.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2018(S2)
[3]骨肉瘤临床循证诊疗指南[J]. 郭卫,牛晓辉,肖建如,蔡郑东.  中华骨与关节外科杂志. 2018(04)
[4]骨肉瘤化疗耐药分子机制的相关研究进展[J]. 王雅灵,闵大六.  癌症进展. 2016(04)

硕士论文
[1]PKM2在人骨肉瘤组织中的表达及临床意义[D]. 刘政选.南华大学 2017



本文编号：3469073