KIF21B基因在骨肉瘤增殖及转移中的作用

发布时间：2021-11-14 09:08

　　研究目的:研究探讨人体肌动蛋白家族成员Homo sapiens kinesin family member21B（KIF21B）基因在骨肉瘤的增殖及迁移这两个进程当中起到的作用。方法:首先在培养的HOS,Saos-2,U-2 OS三个常用骨肉瘤细胞系中应用实时定量PCR（qPCR）方法检测KIF21B基因的表达丰度ACT以验证其在骨肉瘤中的异常过度表达。随后以KIF21B基因为模板,设计RNA干扰靶点序列,构建目的基因RNA干扰慢病毒载体并包装（shRNA慢病毒）。对体外培养的U-2 OS细胞进行shRNA慢病毒感染达到敲除实验组KIF21B基因的目的,并检测其中目标基因的敲除率（实验中敲除率达到74.9%）,检测合格的细胞分入实验组shK][F21B组（正常目的细胞,加入shRNA病毒感染的细胞组）并引入另一组对照组shCtrl组（正常目的细胞,阴性对照病毒感染的细胞组）。将两组细胞培养后分别进行Western blot试验验证靶点的有效性,然后进行Ciligo细胞计数、MTT细胞活力检测、细胞周期分析及细胞凋亡检测,比较两组实验结果以探究KIF21B基因在骨肉瘤细胞增殖中的作用。同... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－２：两组感染细胞在培养７２小时后，用显微镜进行观察

?第３章结果???表３－２及图３－３：使用ｑＰＣＲ实验中２＾＾１方法测算实验组及对照组目的基因表达丰度。对照??组ｓｈＣｔｒｌ中样本２＿ＡＡＣｔ均值为］．００２±０．０７４，大于实验组的０．０２５１?土０．０７４，经两组配对ｔ检验（样??本量为３），两组间在统计学上存在明显差异（＊＊Ｐ＝０．０００２＜０．０１）。可见两组ＡＣｔ值结果中??实验组大于对照组。将２－ＡＡＣｔ平均值代入计算公式（ｓｈＣｔｒＩ－ｓｈＫＩＦ２１Ｂ）?／ｓｈＣｔｒｌ计算得到目的??基因敲减效率约为７４．９％。??Ｔａｂｌｅ?３－２?ａｎｄ?ｆｉｇｕｒｅ?３－３：?ｕｓｅ?ｔｈｅ?２＂ＡＡＣｔ?ｍｅｔｈｏｄ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｑＰＣＲ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｔｏ?ｍｅａｓｕｒｅ?ｔｈｅ?ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ??ｇｅｎｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｂｕｎｄａｎｃｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｈｅ?ｍｅａｎ?２＿ＡＡａｖａｌｕｅ?ｏｆ??ｓａｍｐｌｅ?ｉｎ?ｓｈＣｔｒｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗａｓ?１．００２土０．０７４，?ｇｒｅａｔｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ??ｇｒｏｕｐ，?ｗｈｉｃｈ?ｗａｓ?０．０２５１?±０．０７４．?Ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｔ－ｔｅｓｔ?ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ?（ｎ＝３），?ｔｈｅｒｅ?ｗａｓ?ａ??ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｈｅ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ?（＊＊Ｐ＝０．０００２＜０．０】）．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｗｏ


本文编号：3494359