MicroRNA-451介导骨肉瘤细胞抗失巢凋亡的作用和机制研究

发布时间：2021-11-21 11:11

　　研究背景骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤,好发于青少年,有高度的侵袭和转移特性,预后较差。自二十世纪七十年代起,由于新辅助化疗的应用,骨肉瘤的五年生存率逐渐提高到65%以上,但是自九十年代以来,骨肉瘤的治疗效果进入平台期,生存率一直没有明显的提高。骨肉瘤转移是引起患者最终死亡的主要原因,深入理解转移的机制,对于改善治疗效果有重要意义。失巢凋亡是由细胞脱离细胞外基质引起的程序性细胞死亡。在生理情况下,失巢凋亡可以阻止脱落的细胞重新粘附到不正确的位置上,对机体起着重要的防御作用。肿瘤细胞初始以原发灶的形式存在,待其脱离细胞外基质后,极少数获得抗失巢凋亡能力,可以在悬浮条件下存活,进而通过血液、淋巴等途径转移到其他器官增殖和分化。目前普遍认为,在肿瘤的发生发展过程中,抗失巢凋亡是转移和侵袭的重要基础。肿瘤细胞通过上皮-间质转化、激活抗凋亡的信号通路、调整细胞能量代谢等方式获得抗失巢凋亡的能力,而microRNA参与其中,起着重要作用。MicroRNA是一类非编码的小RNA分子,miRNA基因经过RNA聚合酶II、DROSHA、DICER等酶的转录加工,最终形成成熟的miRNA。成熟的miRN... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．骨肉瘤Ｕ２０Ｓ和Ｓａｏｓ－２细胞在黏附和失黏附条件下的形态

组中ｍｉＲ－４５１表达水平低于贴壁培养组（０．４５３±０．２３４?ｖｓ．?０．７３４±０．３４５）。采用独??立样本ｔ检验得出，在骨肉瘤Ｓａｏｓ－２和Ｕ２０Ｓ细胞中，ｍｉＲ－４５１在失巢凋亡模型??组中的表达水平较贴壁培养组下降，差异有统计学意义（ｐ＜〇．〇５）（图２）。??■贴壁培养组??ｊ?，?？？夫继凋亡组??Ｉ?Ｉ?Ｉ??＾?Ｓａｏｓ－２?Ｕ２０Ｓ??图２．贴壁培养组和失巢凋亡模型组ｍｉＲ－４５１的表达差异。Ｓａｏｓ－２失巢凋亡??模型组中ｍｉＲ－４５１表达量低于贴壁培养组；Ｕ２０Ｓ失巢凋亡模型组中ｍｉＲ－４５１表??达量低于贴壁培养组。差异均有统计学意义（＊ｐ＜０．０５）。??Ｆｉｇ?２．?Ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｏｆ?ｍｉＲ－４５１?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ａｄｈｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ａｎｏｉｋｉｓ??ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｍｉＲ－４５１?ｉｎ?Ｓａｏｓ－２?ａｎｏｉｋｉｓ?ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗａｓ??ｌｏｗｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｉｎ?ａｄｈｅｒｅｎｔ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｇｒｏｕｐ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｍｉＲ－４５１?ｉｎ??Ｕ２０Ｓ?ａｎｏｉｋｉｓ?ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗａｓ?ｌｏｗｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｉｎ?ａｄｈｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｗａｓ??ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ?（＊?ｐ?＜?０．０５）．??２７??

质粒转染组。转染后，首先提取四个实验组细胞的总ＲＮＡ，通过电泳对其完整??性进行检测，可见２８ｓ、１８ｓ、５ｓ三条带显示清晰，表明总ＲＮＡ未出现明显降解??（图３）。进一步用荧光定量ＰＣＲ仪扩增反应体系，结果显示，与空白对照组、??转染试剂组、ｍｉＲ－４５１?ＮＣ组相比，ｍｉＲ－４５１在ｍｉＲ－４５１质粒转染组Ｕ２０Ｓ细胞??的表达水平升高，差异有统计学意义（ｐ＜〇．〇５）；而在空白对照组、转染试剂组??和ｍｉＲ－４５１?ＮＣ组Ｕ２０Ｓ细胞之间，ｍｉＲ－４５１的表达水平差异无统计学意义??（ｐ＞０．０５）（图?４）。??图３．?ＲＮＡ提取电泳图（１：空白对照组；２：转染试剂组；３：?ｍｉＲ－４５１?ＮＣ??组；４：?ｍｉＲ－４５１质粒转染组）。可见２８ｓ、１８ｓ、５ｓ三条带显示清晰，总ＲＮＡ??未出现明显降解。??Ｆｉｇ?３．?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ＲＮＡ．?（１：?ｂｌａｎｋ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?２：?ｒｅａｇｅｎｔ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｇｒｏｕｐ；?３：?ｍｉＲ－４５１?ＮＣ?ｇｒｏｕｐ；?４：?ｍｉＲ－４５１?ｐｌａｓｍｉｄ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｇｒｏｕｐ）??Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｓｈｏｗｅｄ?ｔｈａｔ?２８ｓ，１８ｓ?ａｎｄ?５ｓ?ＲＮＡ?ｂａｎｄｓ?ｗｅｒｅ?ｃｌｅａｒｌｙ?ｖｉｓｉｂｌｅ，??ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ?ｔｈａｔ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｗａｓ?ｎｏｔ?ｄｅｇｒａｄｅｄ．??２８??

【参考文献】：
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本文编号：3509402