神经肽Y调控成骨和破骨分化与Wnt信号通路相关的机制研究

发布时间：2021-12-02 03:16

　　临床骨科患者中可观察到骨折生理性愈合,以及病理性的骨延迟愈合、骨不愈合等过程,其生物学机制复杂,是目前研究领域的热点和难点。近年研究显示,经典及非经典Wnt信号通路在调控骨组织愈合过程中至关重要,同时外周神经系统分泌的神经肽类物质也在骨组织愈合中发挥重要作用。基于上述事实,本研究拟回答下列几个问题:1神经肽类物质是否通过Wnt信号通路调控骨组织愈合;2该调控的具体分子机制如何;3该调控的细胞生物学效应如何。第1部分:探讨骨折愈合模型中Wnt信号通路的表达情况及神经肽类物质对其的调控效应。目的:筛选可能调控经典及非经典Wnt信号通路的神经肽类物质并初步探讨其效应。方法:首先,通过制作小鼠骨折模型,于术后一周获取小鼠的骨折愈合骨痂组织,分析组织内神经肽类物质如降钙素基因相关肽（Calcitonin generelated peptide,CGRP）、P物质（Substance p,SP）、血管活性肠肽（Vasoactive Intestinal Peptide,VIP）和神经肽Y（Neuropeptide Y,NPY）,以及经典Wnt信号通路配体Wnt3a及非经典Wnt信号通路配体Wnt5... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：123 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

经典及非经典Wnt信号通路示意图

图 1-6 神经肽 NPY 对小鼠骨髓细胞成骨蛋白表达影响养的成骨分化 BMSCs 在神经肽 NPY 刺激下 ALP、RunX2 和β-a带（A），ALP（B）和 RunX2（C）蛋白质改变对比Figure 1-6 influencec of NPY on osteoblastic gene expressions in bferentiation ofALP, RunX2 and β-actin protein expression bands (unX2 (C) proteins in osteoblast differentiated BMSCs induced by

2.3 结果2.3.1 成骨性 MC3T3-E1 细胞及破骨性 RAW264.7 细胞培养光镜下观察成骨性MC3T3-E1细胞及破骨性RAW264.7细胞（图2-1），结果显示：（1）原代MC3T3-E1细胞呈密集排列的不规则形状，经过7 d成骨诱导培养后，细胞呈砂砾状；经过茜素红染色结果示各实验组细胞外基质均有不同程度的钙盐沉积。（2）RAW264.7细胞呈现小圆形细胞，细胞生长迅速，经过破骨诱导培养7 d后，细胞呈现梭形、大的不规则圆形等多种形态。图2-1 小鼠MC3T3-E1和RAW264.7细胞成骨/破骨诱导培养Figure 2-1 Differentiation processes of MC3T3-E1 and RAW264.72.3.2 siRNA/β-catenin 及 siRNA/NLK 慢病毒转染 MC3T3-E1 细胞的稳定细胞株将通过搭载小分子干扰β-catenin或者NLK基因RNA片段的慢病毒，导入正常培养的MC3T3-E1细胞内，将其细胞进行成骨诱导培养，分析经典或者非经典Wnt信号通路的改变情况


本文编号：3527617