超微粒径阳离子碳量子点介导的神经干细胞定向分化神经元及体内脊髓损伤修复研究
发布时间：2021-12-11 08:47
利用外源性或内源性神经干细胞（neural stem cell,NSCs）来进行脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）修复一直是一项世界级难题,这主要是因为处于损伤部位复杂微环境的神经干细胞倾向于分化为星形胶质细胞而不是神经元,分化的星形胶质细胞及其分泌物还可进一步形成胶质瘢痕,构成神经再生的物理和化学屏障。虽然目前已有多种策略可在损伤区域实现神经元的定向分化,但采用超微粒径阳离子碳量子点（cationic carbon quantum dots,CQDs）诱导NSCs定向分化为神经元,以此来促进脊髓损伤修复的研究尚未见报道。本课题首次研究了阳离子碳量子点除了依赖于其光学性质（如生物标记和生物成像等）和阳离子性质（如基因治疗和药物输送等）外对细胞分化命运的影响。本研究以枸杞寡糖（Lycium barbarum L.oligosaccharide,LBOS）为碳源,乙二胺和PEI为阳离子试剂,通过一步水热合成法制备出了超微粒径的阳离子碳量子点（1nm）。体外实验表明,超微粒径的阳离子碳量子点可显著抑制NSCs向星形胶质细胞分化,并在不影响神经元分化...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
（A）枸杞寡糖的高效凝胶渗透色谱图；（B）Bradford法的蛋白标准曲线；（C）枸杞寡糖的质谱图
超微粒径阳离子碳量子点介导的神经干细胞定向分化神经元及体内脊髓损伤修复研究20图2.2使用HPLC法测定枸杞寡糖的单糖组成：(1)D-甘露糖；(2)L-鼠李糖；(3)D-葡萄糖醛酸；(4)乳糖；(5)D-半乳糖；(6)L-阿拉伯糖；(7)D-木糖；(8)L-海藻糖Fig2.2TheHPLCspectraofMonosaccharidecompositionofLBOS.Peaks:(1)D-mannose;(2)L-rhamnose;(3)D-Galacturonicacid;(4)lactose;(5)D-galactose;(6)L-arabinose;(7)D-xylose;(8)L-fucose2.4本章小结经过水提醇沉法、Seveg法、柱层析法从中药枸杞果实中提纯出枸杞寡糖。Bradford法测得寡糖中残余蛋白含量为0.14%，表明精制寡糖中几乎不含杂蛋白；高效凝胶渗透色谱测得的HPGPC谱图中仅存在一个正态分布良好的钟形峰，表明精制枸杞寡糖分子量分布集中且无小分子杂质存在；离子阱质谱测得寡糖的分子量为862，表明枸杞寡糖中的单糖个数约为5个，结合单糖组成结果进一步证明这5个单糖均为D-半乳糖。
江苏大学硕士论文25拍摄EGFP游离质粒和CQDs/DNA纳米粒的迁移情况。3.3结果与讨论3.3.1碳量子点的纯度分析经过减压浓缩和透析，制备的碳量子点理论上不存在游离的反应物（乙二胺可随水蒸气挥发；PEI和枸杞寡糖的分子量分别为1200和862；使用截留量为300Da的透析袋并收集透析外液）。为了证实这一观点，通过核磁共振氢谱来比较反应产物碳量子点与三种反应物的化学位移，进而确定产物碳量子点中反应物是否残留，结果如图3.1所示。图3.1（A）乙二胺的1H-NMR谱图；（B）枸杞寡糖的1H-NMR谱图；（C）PEI的1H-NMR谱图；（D）未透析碳量子点的1H-NMR谱图；（E）透析碳量子点的1H-NMR谱图；（F）透析外液中碳量子点在紫外灯下的荧光Fig3.11H-NMRspectraofethylenediamine(A),theLBOS(B),PEI(C),theundialyzedCQDs(D)andthedialyzedCQDs(E).(F)showedthefluorescenceofexternaldialysateundera365nmUVlampexcitation由图3.1可看出，枸杞寡糖的化学位移集中在δ3.1-4.0ppm，PEI和乙二胺的化
【参考文献】：
期刊论文
[1]继发性脊髓损伤微环境的研究进展[J]. 张盼,赵红卫,卢斌,彭龙. 海南医学. 2018(19)
[2]脊髓损伤再生修复研究现状及展望[J]. 郭艳苏,曹河圻. 中国科学基金. 2018(04)
[3]枸杞多糖的神经保护作用机制研究进展[J]. 于国华,裴纹萱,孙慧娟,王嘉馨,王武斌,李娟,李森,卢涛,史渊源,董玲. 中国实验方剂学杂志. 2018(09)
本文编号：3534372
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
（A）枸杞寡糖的高效凝胶渗透色谱图；（B）Bradford法的蛋白标准曲线；（C）枸杞寡糖的质谱图
超微粒径阳离子碳量子点介导的神经干细胞定向分化神经元及体内脊髓损伤修复研究20图2.2使用HPLC法测定枸杞寡糖的单糖组成：(1)D-甘露糖；(2)L-鼠李糖；(3)D-葡萄糖醛酸；(4)乳糖；(5)D-半乳糖；(6)L-阿拉伯糖；(7)D-木糖；(8)L-海藻糖Fig2.2TheHPLCspectraofMonosaccharidecompositionofLBOS.Peaks:(1)D-mannose;(2)L-rhamnose;(3)D-Galacturonicacid;(4)lactose;(5)D-galactose;(6)L-arabinose;(7)D-xylose;(8)L-fucose2.4本章小结经过水提醇沉法、Seveg法、柱层析法从中药枸杞果实中提纯出枸杞寡糖。Bradford法测得寡糖中残余蛋白含量为0.14%，表明精制寡糖中几乎不含杂蛋白；高效凝胶渗透色谱测得的HPGPC谱图中仅存在一个正态分布良好的钟形峰，表明精制枸杞寡糖分子量分布集中且无小分子杂质存在；离子阱质谱测得寡糖的分子量为862，表明枸杞寡糖中的单糖个数约为5个，结合单糖组成结果进一步证明这5个单糖均为D-半乳糖。
江苏大学硕士论文25拍摄EGFP游离质粒和CQDs/DNA纳米粒的迁移情况。3.3结果与讨论3.3.1碳量子点的纯度分析经过减压浓缩和透析，制备的碳量子点理论上不存在游离的反应物（乙二胺可随水蒸气挥发；PEI和枸杞寡糖的分子量分别为1200和862；使用截留量为300Da的透析袋并收集透析外液）。为了证实这一观点，通过核磁共振氢谱来比较反应产物碳量子点与三种反应物的化学位移，进而确定产物碳量子点中反应物是否残留，结果如图3.1所示。图3.1（A）乙二胺的1H-NMR谱图；（B）枸杞寡糖的1H-NMR谱图；（C）PEI的1H-NMR谱图；（D）未透析碳量子点的1H-NMR谱图；（E）透析碳量子点的1H-NMR谱图；（F）透析外液中碳量子点在紫外灯下的荧光Fig3.11H-NMRspectraofethylenediamine(A),theLBOS(B),PEI(C),theundialyzedCQDs(D)andthedialyzedCQDs(E).(F)showedthefluorescenceofexternaldialysateundera365nmUVlampexcitation由图3.1可看出，枸杞寡糖的化学位移集中在δ3.1-4.0ppm，PEI和乙二胺的化
【参考文献】：
期刊论文
[1]继发性脊髓损伤微环境的研究进展[J]. 张盼,赵红卫,卢斌,彭龙. 海南医学. 2018(19)
[2]脊髓损伤再生修复研究现状及展望[J]. 郭艳苏,曹河圻. 中国科学基金. 2018(04)
[3]枸杞多糖的神经保护作用机制研究进展[J]. 于国华,裴纹萱,孙慧娟,王嘉馨,王武斌,李娟,李森,卢涛,史渊源,董玲. 中国实验方剂学杂志. 2018(09)
本文编号：3534372
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