SUMO化修饰在人黄韧带骨化中作用机制研究

发布时间：2021-12-23 10:16

　　目的:探明人黄韧带骨化（ossification of ligament flavum,OLF）的SUMO（small ubiquitin-like modifier）化修饰情况;通过诱导BMSCs（bone marrow stromal cells）成骨分化,建立OLF成纤维细胞骨化模型,弄清楚BMSCs被诱导成骨分化后SUMO表达情况及细胞分化情况,研究SUMO1对BMSCs成骨分化的影响;通过施加缺氧应激,获知SUMO1表达改变时,被诱导成骨分化后的BMSCs缺氧应激能力改变情况。方法:通过临床手术获取OLF患者及黄韧带正常的脊柱疾患患者黄韧带组织,采用Ⅰ型胶原酶消化法和组织块培养法二者结合方法分离培养出其中成纤维细胞,观察细胞形态;使用Western Blot方法检测OLF成纤维细胞的SUMO表达及SUMO化修饰情况;通过分离和培养小鼠股骨骨髓内BMSCs,使用骨化诱导试剂盒诱导其骨化,建立OLF细胞模型,检测骨化标记物ALP（alkaline phosphatase）、COL-I（collagen1）、OCN（osteocalcin）、Runx2（runt-related t... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

其中一例OLF患者的X-ray、CT、MRI表现，可见在T11/12水平椎

图 1.2 图 1.1 中 OLF 患者 T11/12 水平椎管内骨化黄韧带行病理学检查，提示为骨组织伴钙化，表面可见透明变性纤维组织，符合黄韧带骨化1.2.2 OLF 黄韧带内成纤维细胞特点OLF 患者来源组织完全骨化部位几乎很难分离培养出成纤维细胞，而在骨化与正常交界部位黄韧带组织内可分离培养出数量较少的成纤维细胞，但其梭形形态不典型，细胞数目明显低于正常组织来源细胞，且自第 4 代便出现去分化现象，实验价值降低（图 1.3）。

天津医科大学博士学位论文 一、OLF成纤维细胞 SUMO 化修饰水平研究梭形形态，细胞数目众多；B：OLF 患者骨化黄韧带骨化周围交界部位组织来源的成纤维细胞，细胞在梭形形态基础上呈现一定不规则表现，成纤维细胞数目相对较少，骨化病灶内几乎无活性细胞存在，骨化病灶周围出现软骨样细胞，且该类细胞无法迁徙出病灶组织1.2.3 OLF 来源成纤维细胞的结合 SUMO1 蛋白表达降低选取 Western Blot 方法检测 SUMO1 蛋白的表达情况，进行对比，发现病理来源成纤维细胞中的结合 SUMO1 蛋白低于正常组织来源成纤维细胞。说明其SUMO1 化修饰水平下调（图 1.4）。

【参考文献】：
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本文编号：3548292