SVF与PRP联合应用对BMSCs成骨分化影响研究

发布时间：2021-12-30 18:42

　　目的:在整形外科手术中,骨缺损的有效重建仍然是临床医生面临的一项严峻挑战。然而当前仍无有效的方法能够解决此难题。再生医学的迅速发展为临床骨缺损的治疗提供新的选择,实现干细胞定向成骨分化是骨再生需解决的关键技术。在一些前瞻性的临床试验研究中,以脂肪来源血管基质成分（Stromal vascular fraction,SVF）为基础的细胞治疗以及与富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）联合应用仍处于临床前研究向临床应用转化的早期阶段,需要大规模长期随访的临床试验。于体外研究SVF与PRP对骨缺损周围骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）作用,以及两者联合对骨缺损的修复作用。研究方法:1.无菌条件下,于SD大鼠腹股沟手术切取脂肪组织,提取大鼠左心房血液样本。提取、培养SVF细胞和制备PRP。2.利用Transwell小室建立SVF与BMSCs共培养体系,探究SVF的旁分泌作用对BMSCs增殖和成骨分化效能影响,以及SVF与PRP联合应用作用。结果:1.CCK-8结果显示SVF、PRP以及SVF+PRP三组... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：37 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

A图代表PRPB图代表PRP凝胶

中国医科大学硕士学位论文73结果3.1BMSCs形态学观察及多向分化验证BMSCs被证实可分化为成骨细胞和成脂细胞（图3-1BC)，证实了其能够分化为多种细胞系的潜能。图3-1BMSCs镜下观A：第四代BMSCs显微镜下观（10X）；B：成骨分化鉴定；C：成脂分化鉴定3.2PRP凝胶制备通过二次离心法得到PRP（图3-2A），使用全血细胞分析仪对全血及PRP进行血小板的测定，全血和PRP中血小板浓度分析：全血和PRP中血小板浓度分别为（120.4±6.67）1011/L和(433.76±49.99)1011/L，比较差异有统计学意义(t=8.813，P<0.05)。凝血酶-CaCl2溶液激活剂激活PRP得到血小板活化后的PRP凝胶(如图3-2B)。图3-2A图代表PRPB图代表PRP凝胶

中国医科大学硕士学位论文83.3SVF提取以及形态学观察第3代SD大鼠脂肪组织来源血管基质成分SVF于镜下观察细胞形态，细胞呈长梭形，贴壁生长，细胞生长呈集落样。图3-3P3代SVF形态学观察（倒置显微镜10X）3.4共培养BMSCs细胞增殖检测结果为了探讨SVF以及PRP是否能影响BMSCs的增殖，共培养2d及7d后于显微镜下观察（图3-4AB），发现2d时D组BMSCs增殖最明显，7d时各组间差异不明显。同时应用CCK8试剂盒进行了细胞增殖测定。结果如图3-4C所示，D组（BMSCs+SVF+PRP组）BMSCs的增殖率24h以及48h明显高于其他组。B4X

【参考文献】：
期刊论文
[1]Platelet-rich plasma enhances adipose-derived stem cell-mediated angiogenesis in a mouse ischemic hindlimb model[J]. Chia-Fang Chen,Han-Tsung Liao.  World Journal of Stem Cells. 2018(12)
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[3]Adipose-derived stromal cells: Their identity and uses in clinical trials, an update[J]. Louis Casteilla,Valérie Planat-Benard,Patrick Laharrague,Béatrice Cousin.  World Journal of Stem Cells. 2011(04)



本文编号：3558769