紫杉醇对骨巨细胞瘤细胞活性和凋亡的影响及其作用机制

发布时间：2022-01-01 09:08

　　目的:紫杉醇是有效的抗肿瘤药物,已被广泛应用于多种癌症的治疗中,但紫杉醇对骨巨细胞瘤（Giant Cell Tumor of Bone,GCTB）细胞的抗增殖和促凋亡的作用机制尚不明确。因此,本研究旨在评价紫杉醇对骨巨细胞瘤的抗肿瘤能力及其潜在的信号转导机制。方法:首先,使用CCK-8试剂盒和流式细胞术测定紫杉醇对HS737.T细胞生存和凋亡的影响。接下来通过RNA-seq和生物信息学技术确定差异表达基因（Differentially Expressed Genes,DEGs）,分析相关通路,并采用实时定量聚合酶链反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）验证部分DEGs的准确性。然后采用ClueGO技术解码和可视化GO Terms,绘制DEGs的蛋白-蛋白相互作用（Protein-Protein Interaction,PPI）网络图。用蛋白免疫印迹（Western Blotting,WB）验证差异表达基因、Caspase-3和PARP1的裂解水平、p53磷酸化水平以及TP53INP1表达水平。最后,采用R... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

紫杉醇的分子结构

127.流式细胞仪检测，AnnexinV-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。实验结果一、紫杉醇抑制HS737.T细胞的增殖与生存CCK-8试剂盒的细胞活力实验结果表明：紫杉醇对HS737.T细胞增殖和生存有抑制作用。实验数据提示，经不同浓度梯度紫杉醇处理后，与对照组细胞相比，细胞生存率随药物浓度的增加而显著降低。根据所测抑制率计算HS737.T细胞的IC50值仅为9.78ng/ml，而长春新碱对HS737.T细胞的IC50为24.5ng/ml(图2A)，紫杉醇的半抑制浓度远低于长春新碱，因而紫杉醇对HS737.T细胞有较好的药物作用效果，同时IC50值也为后续实验中紫杉醇药物浓度的确定提供参考。在10ng/ml紫杉醇作用下，细胞的抑制作用随作用时间的增加而增加(图2B)。图2紫杉醇对骨巨细胞瘤细胞活性的影响Figure2.ImpactofpaclitaxelontheviabilityofGCTB

13二、紫杉醇促进HS737.T细胞凋亡与未经药物处理的对照组细胞相比，经紫杉醇处理后，HS737.T细胞的细胞凋亡明显增加。分别使用药物浓度为5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml的紫杉醇作用于HS737.T细胞12h后，经流式细胞仪测得的凋亡率分别为27.03%、37.90%、52.16%(图3A、B)。这一结果显示，随着药物浓度的增加，HS737.T细胞的凋亡率增加，进一步揭示了紫杉醇可诱导HS737.T细胞的凋亡。图3紫杉醇对骨巨细胞瘤细胞凋亡的影响Figure3.ImpactofpaclitaxelontheapoptosisofGCTB


本文编号：3562061