右美托咪定预处理抑制RyR2磷酸化减轻H9C2心肌细胞氧糖剥夺/复氧损伤

发布时间：2022-02-26 15:43

　　目的:心肌缺血/再灌注损伤是一种常见的复杂生理病理过程,而Ca2+调控紊乱是导致缺血再灌注后心肌功能障碍和细胞损伤的重要原因之一。右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）作为一种临床常用的镇静镇痛药,其器官保护作用近年来被越来越多的研究者报道。在心肌缺血再灌注损伤中,已经证明Dex可以通过抑制ROS及激活抗炎通路等途径发挥保护保用,而它是否可以通过调节钙平衡来减轻缺血再灌注心肌的损伤,目前尚不清楚。本研究旨在探究Dex预处理对H9C2细胞氧糖剥夺/复氧（Oxygen Glucose Deprivation/Reperfusion,OGD/R）损伤模型中钙离子的影响及其相关分子机制。方法:1、选用H9C2细胞,采用缺氧小室对细胞进行OGD 24 h的处理,随后复氧3h,建立OGD/R模型;Dex预处理组细胞在OGD前经不同浓度Dex（0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L）预处理1 h,其余处理同OGD/R组;对照组细胞常规培养。2、倒置显微镜下观察细胞形态,应用甲基噻唑蓝[3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-... 

【文章来源】：苏州大学江苏省211工程院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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第一章 引言
第二章 材料与方法
    2.1 实验对象
    2.2 细胞培养
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 仪器及耗材
        2.2.3 培养方法
    2.3 氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型的建立
        2.3.1 实验试剂
        2.3.2 实验仪器
        2.3.3 实验分组
        2.3.4 造模方法
    2.4 光学显微镜下观察心肌细胞形态学的变化
        2.4.1 实验仪器
        2.4.2 实验方法
    2.5 甲基噻唑蓝比色法（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium bromide，MTT）检测细胞活力
        2.5.1 实验试剂
        2.5.2 实验仪器
        2.5.3 实验方法
    2.6 2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase， LDH）释放率
        2.6.1 实验试剂
        2.6.2 实验仪器
        2.6.3 实验方法
    2.7 钙成像记录
        2.7.1 实验试剂
        2.7.2 实验仪器
        2.7.3 实验方法
        2.7.4 实验试剂(钙成像第二部分)
        2.7.5 实验仪器(钙成像第二部分)
        2.7.6 实验方法
    2.8 Q-PCR检测mRNA表达水平
        2.8.1 实验试剂
        2.8.2 PCR引物
        2.8.3 实验仪器
        2.8.4 实验方法
    2.9 Western Blotting检测蛋白表达水平
        2.9.1 实验试剂
        2.9.2 实验仪器
        2.9.3 实验方法
    2.10 基因沉默
        2.10.1 实验试剂
        2.10.2 实验分组
        2.10.3 实验方法(以6孔板为例)
    2.11 统计方法
第三章 结果
    3.1 Dex预处理能减轻H9C2心肌细胞OGD/R损伤并参与细胞内的钙调控
        3.1.1 细胞活力(MTT法检测)随着缺氧/复氧时间的变化情况
        3.1.2 光学显微镜下细胞形态学的变化
        3.1.3 Dex预处理能显著提高心肌细胞活力,减少LDH释放率
        3.1.4 Dex预处理能明显抑制细胞内钙超载
    3.2 Dex参与对心肌细胞内FKBP12.6及RyR2的表达调控
        3.2.1 Dex预处理能上调FKBP12.6在mRNA及蛋白水平的表达
        3.2.2 Dex预处理能抑制p-S2814RyR2及凋亡因子Cleaved-Caspase-3的蛋白表达
    3.3 基因沉默FKBP12.6能反转Dex对OGD/R心肌细胞的保护作用
        3.3.1 Real-timePCR法检测FKBP12.6基因沉默效率,确定转染时间
        3.3.2 基因沉默FKBP12.6,MTT法检测细胞活力及2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液LDH释放率的结果
        3.3.3 基因沉默FKBP12.6,钙成像法检测细胞内钙离子
        3.3.4 基因沉默FKBP12.6,Western blotting检测RyR2、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3的蛋白表达及RyR2磷酸化的改变
第四章 讨论
总结
参考文献
Review
    参考文献
攻读学位期间公开发表的论文与会议摘要
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]右美托咪啶预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及钙循环调控蛋白的影响[J]. 李霞,彭碧文,董航.  海南医学. 2015(18)
[2]心脑缺血再灌注损伤的机制及防治策略研究进展[J]. 夏强,钱令波.  浙江大学学报(医学版). 2010(06)
[3]心肌缺血/再灌注损伤机制研究进展[J]. 刘胜中,杨双强.  实用医院临床杂志. 2007(01)
[4]肠缺血/再灌注损伤后白介素1-β水平与磷脂酶A2激活的关系[J]. 颜光涛,郝秀华,薛辉,王录焕,李英丽,石丽萍.  生理学报. 2002(01)
[5]锌对缺血再灌注肝脏自由基含量和细胞凋亡的影响[J]. 蒋与刚,郭长江,韦京豫,杨继军,苏俊锋,王先远,高兰兴.  中国应用生理学杂志. 2001(03)
[6]心肌缺血再灌注损伤亚细胞Ca2+反常与ATP酶泵功能抑制[J]. 谷天祥,张显清,谷春久,石玉秀,李厚文,姜桂娥,赵凤凯,王天骄.  中华心血管病杂志. 2001(07)
[7]补体耗竭对心肌缺血再灌注的保护作用及机制[J]. 张磊,马虹,黄守坚,孙家钧.  中华心血管病杂志. 2001(06)

硕士论文
[1]右美托咪定预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌线粒体功能的影响[D]. 陆沁源.江苏大学 2016
[2]FKBP12.6蛋白缺失对脓毒症小鼠心肌损害作用的机理研究[D]. 孔令杰.山西医科大学 2012



本文编号：3644727