血管性血友病因子（von Willebrand factor,VWF）在骨肉瘤中的表达及其在迁移和侵袭过程中的作用研究

发布时间：2022-04-26 22:49

　　研究背景:血管性血友病因子（von Willebrand factor,VWF）主要是由血管内皮细胞和巨核细胞产生的一种超大分子量的多聚体糖蛋白,细胞内合成的VWF可以立即持续地分泌到细胞外,也可以超大型VWF分子（ultra-large VWF,UL-VWF）的形式储存于血小板的α颗粒和内皮细胞的Weibel-Palade小体中。当血管壁受损或受到某些炎症因子刺激时,VWF被释放到血液循环中,一方面通过其A3区与血管内皮下Ⅰ型、Ⅲ型胶原的α-1链结合;另一方面通过A1区与血小板糖蛋白Ibα（glycoprotein Ibα,GPIbα）结合,成为联系血小板和内皮基质的桥梁,在机体止血和血栓的形成过程中发挥着重要的作用。近年来,许多研究表明VWF除了在止血中起着关键作用,在机体炎症的发生、组织的损伤和修复、血管新生、免疫调节以及癌症转移等众多病理生理过程中也发挥着重要的作用。关于VWF在肿瘤转移中的作用,有研究猜测其可能通过参与肿瘤细胞黏附至血小板和内皮表面来促进肿瘤细胞的外渗和转移。而血小板在肿瘤转移中的作用已被广泛研究,肿瘤细胞通过诱导血小板的聚集并形成杂聚体以保护其逃脱机体的免疫... 

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
引言
    VWF分子的合成与分布
    VWF的结构与功能
    VWF和肿瘤关系的研究进展
    VWF和骨肉瘤关系的研究进展
第一部分 VWF在骨肉瘤中的表达研究
    1 实验材料与试剂
        1.1 一般临床资料
        1.2 细胞系
        1.3 实验试剂
        1.4 实验仪器和设备
        1.5 常用缓冲液
    2 实验方法与步骤
        2.1 标本收集与准备
        2.2 酶联免疫吸附法检测血浆VWF抗原
        2.3 HE染色
        2.4 免疫组织化学染色(IHC)
        2.5 蛋白质免疫印迹实验(Western blot)
        2.6 免疫荧光实验
        2.7 VWF多聚体电泳
    3 统计学分析
    4 实验结果
        4.1 骨肉瘤患者血浆标本中VWF的表达水平检测
        4.2 骨肉瘤患者病理组织标本中VWF的表达水平检测
        4.3 人骨肉瘤细胞系SAOS2中VWF的表达检测
        4.4 多聚体电泳检测SAOS2中VWF的表达模式
    5 讨论
第二部分 VWF在骨肉瘤细胞迁移和侵袭过程中的作用研究
    1 实验材料与试剂
        1.1 细胞系
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器和设备
        1.4 常用缓冲液
    2 实验方法与步骤
        2.1 PMA处理细胞
        2.2 免疫荧光实验
        2.3 流式细胞术(Flow Cytometric Analysis,FCM)
        2.4 VWF多聚体电泳
        2.5 静态条件下血小板黏附实验
        2.6 剪切流动条件下血小板黏附实验
        2.7 Cell Counting Kit-8(CCK8)实验
        2.8 细胞迁移、侵袭实验-Transwell
        2.9 ELISA检测PDGF-BB和TGF-β1的含量
    3 统计学分析
    4 实验结果
        4.1 PMA刺激SAOS2细胞中的VWF表达增多
        4.2 VWF多聚体电泳检测PMA刺激后SAOS2细胞中VWF的表达增多
        4.3 静态条件下VWF高表达的SAOS2细胞对血小板的黏附增多
        4.4 剪切流动条件下VWF高表达的SAOS2细胞黏附血小板增多
        4.5 血小板的黏附促进SAOS2细胞的增殖
        4.6 血小板的黏附促进SAOS2细胞的迁移
        4.7 血小板的黏附促进SAOS2细胞的侵袭
        4.8 血小板释放PDGF-BB和TGF-β1促进SAOS2细胞的增殖、迁移和侵袭
    5 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表的论文及基金参与情况
中英文缩写词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Super enhancer inhibitors suppress MYC driven transcriptional amplification and tumor progression in osteosarcoma[J]. Demeng Chen,Zhiqiang Zhao,Zixin Huang,Du-Chu Chen,Xin-Xing Zhu,Yi-Ze Wang,Ya-Wei Yan,Shaojun Tang,Subha Madhavan,Weiyi Ni,Zhan-peng Huang,Wen Li,Weidong Ji,Huangxuan Shen,Shuibin Lin,Yi-Zhou Jiang.  Bone Research. 2018(02)
[2]Plasma von Willebrand factor level as a prognostic indicator of patients with metastatic colorectal carcinoma[J]. Tzu-Chen Lin,Tzeon-Jye Chiou,Jin-Hwang Liu,Chueh-Chuan Yen,Po-Min Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2005(14)



本文编号：3648876