小分子诱导体细胞直接转分化为运动神经元

发布时间：2022-10-04 17:00

　　研究目的:运动神经元损伤或者退行性病变是运动神经元疾病或者脊髓损伤常见的病理特征。移植运动神经元被认为是一种有望促进脊髓功能恢复的治疗手段。之外,获得运动神经元疾病患者的特异性运动神经元可作为疾病模型研究运动神经元疾病的发病机制、筛选和评估新的治疗药物等。然而目前缺乏一种高效、安全地获得运动神经元的方法。本研究筛选小分子化合物诱导体细胞直转分化运动神经元。方法:根据对运动神经元发育过程的认识,选择一些小分子化合物,采取不同的小分子组合来诱导人星形胶质细胞HA1800。通过细胞形态、免疫荧光染色、基因表达和电生理等鉴定诱导的细胞是否具有神经元的形态和运动神经元的表型以及电生理特性,并识别有效的小分子化合物组合。进一步研究有效的小分子组合能否诱导小鼠脊髓星形胶质细胞、人和小鼠的成纤维细胞、人骨髓间充质干细胞转分化为运动神经元。最后,探索小分子在体内能否诱导产生运动神经元。将小分子包含在beads内,移植到小鼠背部皮下或者大鼠坐骨神经周围,通过免疫荧光分析小分子能否诱导beads周围的细胞转分化运动神经元。结果:筛选出五个小分子化合物的组合,它能够将人星形胶质细胞高效、快速、直接转分化为运动... 

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、小分子化合物诱导人和小鼠星形胶质细胞转分化为运动神经元
    1.1 对象和方法
        1.1.1 主要仪器和耗材
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要细胞和动物
        1.1.4 主要溶液、缓冲液、培养基配置
        1.1.5 人正常星形胶质细胞的传代培养、冻存和鉴定
        1.1.6 神经球形成实验
        1.1.7 流式细胞仪检测
        1.1.8 小分子化合物诱导HA1800向运动神经元转分化
        1.1.9 共聚焦时序拍照
        1.1.10 采用差速贴壁法分离、培养新生大鼠成肌细胞
        1.1.11 成肌细胞诱导分化和诱导的运动神经元共培养
        1.1.12 膜片钳技术检测诱导神经元的神经电生理活动
        1.1.13 小分子诱导ALS模型小鼠脊髓星形胶质细胞
        1.1.14 细胞免疫荧光分析
        1.1.15 细胞总RNA提取
        1.1.16 RealtimePCR反应
        1.1.17 数据处理和统计学分析
    1.2 结果
        1.2.1 人星形胶质细胞HA1800鉴定
        1.2.2 筛选小分子化合物诱导HA1800向运动神经元转分化
        1.2.3 小分子化合物诱导神经元的过程并不经历增殖的神经干/祖细胞中间状态
        1.2.4 小分子诱导星形胶质细胞基因表达发生明显改变
        1.2.5 诱导运动神经元的具有神经元电生理活动特征
        1.2.6 诱导的神经元控制肌管的收缩
        1.2.7 小分子化合物诱导ALS模型小鼠脊髓星形胶质细胞变成运动神经元
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、小分子化合物诱导人和小鼠成纤维细胞转分化为运动神经元
    2.1 对象和方法
        2.1.1 主要仪器和耗材
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要细胞和动物
        2.1.4 主要溶液、缓冲液和培养基配置
        2.1.5 成人皮肤成纤维细胞(HSF)分离、培养
        2.1.6 小鼠胚胎成纤维细胞(Mouseembryonicfibroblasts,MEF)分离、培养
        2.1.7 小分子化合物诱导人胚肺成纤维细胞转分化为运动神经元
        2.1.8 小分子化合物诱导新生儿皮肤成纤维细胞和成人皮肤成纤维细胞
        2.1.9 小分子诱导小鼠胚胎成纤维细胞向运动神经元分化
        2.1.10 细胞免疫荧光
        2.1.11 细胞总RNA提取
        2.1.12 RealtimeqPCR分析
        2.1.13 数据处理和统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 鉴定人胚肺成纤维细胞IMR-90的表型
        2.2.2 小分子化合物诱导IMR-90变成运动神经元
        2.2.3 小分子诱导人胚肺成纤维细胞转分化为运动神经元不经历神经干/祖细胞中间状态
        2.2.4 小分子诱导人胚肺成纤维细胞的基因表达发生改变
        2.2.5 小分子化合物诱导新生儿皮肤成纤维细胞和成人皮肤成纤维细胞转分化为运动神经元
        2.2.6 小分子化合物诱导小鼠胚胎成纤维细胞变成运动神经元
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、小分子化合物诱导人骨髓间充质干细胞转分化为运动神经元
    3.1 对象和方法
        3.1.1 主要仪器和耗材
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要的细胞
        3.1.4 主要溶液、缓冲液、培养基配置
        3.1.5 人骨髓间充质干细胞表面分子表达鉴定
        3.1.6 流式细胞仪检测HBMSC的表面抗原
        3.1.7 HBMSC的体外分化鉴定
        3.1.8 小分子化合物诱导人骨髓间充质干细胞转分化为运动神经元
    3.2 结果
        3.2.1 HBMSC的表型和体外分化鉴定
        3.2.2 小分子化合物诱导HBMSC直接转分化为运动神经元
    3.3 讨论
    3.4 小结
四、小分子化合物体内诱导细胞表达运动神经元标志物
    4.1 对象和方法
        4.1.1 主要仪器和耗材
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要细胞和动物
        4.1.4 主要溶液、缓冲液、培养基配置
        4.1.5 小分子在体诱导细胞转分化实验
        4.1.6 组织切片和免疫荧光检测
    4.2 结果
        4.2.1 小分子化合物在体内诱导小鼠皮下组织细胞表达运动神经元的标志物
        4.2.2 小分子化合物体内诱导坐骨神经周围细胞表达运动神经元的标志物
    4.3 讨论
    4.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3685417