间充质干细胞外泌体的纯化及对脊髓损伤修复的初步探讨
发布时间：2022-11-04 20:26
外泌体（Exosomes）是由细胞分泌产生的膜囊泡,负载丰富生物活性分子（protein,lipid,RNA）[1-3]。外泌体具有低免疫原性、较长的半衰期和穿过血脑屏障（BBB）的能力,能传播到体液并到达远处的组织,可以在生物标志物、治疗性载体等几个不同临床范围得到应用[4-7]。间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）可以产生大量的外泌体[8]。MSCs分泌具有强免疫调节活性的生物活性因子、抑制纤维化和凋亡,增强血管生成并促进神经元存活和分化[9],因此被大量用来进行神经修复。目前研究表明MSCs治疗效果可能主要是通过产生的外泌体发挥作用[10-13]。因此,MSCs-exosomes有望成为一种新兴的治疗工具。胎盘组织中的间充质干细胞数量较多,易于培养,而且具有大量增值的能力,并且具有产生丰富外泌体的能力,其具备临床应用价值。在本论文中,我们首先从足月胎儿胎盘组织中分离获了MSCs,并能够稳定长期传代,流式分析结果显示MSCs表达间质类细胞表...
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语索引
第一章 绪论
1.1 研究目的与意义
1.2 间充质干细胞的特性及展望
1.3 外泌体与疾病
1.4 脊髓损伤
1.5 神经营养因子-3研究进展
第二章 间充质干细胞的分离与培养
2.1 实验材料
2.1.1 实验所用细胞系
2.1.2 实验所有仪器
2.1.3 实验试剂
2.2 实验方法
2.2.1 间充质干细胞的分离
2.2.2 间充质干细胞的复苏
2.2.3 间充质干细胞的传代培养
2.2.4 间充质干细胞的冻存
2.2.5 间充质干细胞的分化
2.2.6 间充质干细胞的无血清培养
2.2.7 流式细胞仪检测hPMSCs的免疫表型
2.3 实验结果
2.3.1 人胎盘间充质干细胞原代培养结果
2.3.2 人胎盘来源间充质干细胞的生长特性
2.3.3 流式细胞仪鉴定hPMSCs免疫表型
2.3.4 hPMSc成脂、成骨、成软骨诱导分化
2.4 小结
第三章 间充质干细胞外泌体的纯化与鉴定
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.2.1 间充质干细胞(MSCs)培养
3.2.2 复苏的间充质干细胞扩大培养
3.2.3 外泌体的纯化
3.2.4 BCA法测定外泌体蛋白浓度
3.2.5 Western Blot鉴定外泌体蛋白
3.2.6 透射电子显微镜鉴定外泌体结构
3.3 实验结果
3.3.1 透射电镜下观察外泌体的结构
3.3.2 Western Blot鉴定
3.3.3 BCA测定外泌体蛋白的浓度
3.4 小结
第四章 外泌体对脊髓损伤后的修复作用
引言
4.1 实验动物
4.2 实验材料
4.3 实验方法
4.3.1 实验动物分组
4.3.2 大鼠脊髓背部全横断模型制备
4.3.3 大鼠行为学评估
4.3.4 免疫荧光染色
4.3.5 数据统计学处理
4.4 实验结果
4.4.1 外泌体的处理促进损伤脊髓再生
4.4.2 外泌体能够改善脊髓损伤大鼠的神经性疼痛和膀胱功能障碍
4.4.3 外泌体通过促进内源性神经干细胞的再生达到修复损伤的神经功能
4.5 小结
第五章 间充质干细胞过表达神经营养因子-3
引言
5.1 实验材料
5.2 实验方法
5.2.1 NT3过表达技术路线
5.2.2 人源NT-3基因克隆
5.2.3 pLVX-EF1a-IRES-meCherry-NT-3载体的构建
5.2.4 慢病毒包装
5.2.5 细胞感染
5.2.6 病毒的感染效率
5.2.7 过表达NT-3细胞鉴定
5.2.8 细胞流式分选
5.3 实验结果
5.3.1 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry质粒载体构建
5.3.2 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry质粒载体的表达
5.4 小结
第六章 结论与讨论
第七章 展望与挑战
致谢
参考文献
附录A 攻读硕士期间发表论文目录
本文编号：3701278
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
缩略语索引
第一章 绪论
1.1 研究目的与意义
1.2 间充质干细胞的特性及展望
1.3 外泌体与疾病
1.4 脊髓损伤
1.5 神经营养因子-3研究进展
第二章 间充质干细胞的分离与培养
2.1 实验材料
2.1.1 实验所用细胞系
2.1.2 实验所有仪器
2.1.3 实验试剂
2.2 实验方法
2.2.1 间充质干细胞的分离
2.2.2 间充质干细胞的复苏
2.2.3 间充质干细胞的传代培养
2.2.4 间充质干细胞的冻存
2.2.5 间充质干细胞的分化
2.2.6 间充质干细胞的无血清培养
2.2.7 流式细胞仪检测hPMSCs的免疫表型
2.3 实验结果
2.3.1 人胎盘间充质干细胞原代培养结果
2.3.2 人胎盘来源间充质干细胞的生长特性
2.3.3 流式细胞仪鉴定hPMSCs免疫表型
2.3.4 hPMSc成脂、成骨、成软骨诱导分化
2.4 小结
第三章 间充质干细胞外泌体的纯化与鉴定
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.2.1 间充质干细胞(MSCs)培养
3.2.2 复苏的间充质干细胞扩大培养
3.2.3 外泌体的纯化
3.2.4 BCA法测定外泌体蛋白浓度
3.2.5 Western Blot鉴定外泌体蛋白
3.2.6 透射电子显微镜鉴定外泌体结构
3.3 实验结果
3.3.1 透射电镜下观察外泌体的结构
3.3.2 Western Blot鉴定
3.3.3 BCA测定外泌体蛋白的浓度
3.4 小结
第四章 外泌体对脊髓损伤后的修复作用
引言
4.1 实验动物
4.2 实验材料
4.3 实验方法
4.3.1 实验动物分组
4.3.2 大鼠脊髓背部全横断模型制备
4.3.3 大鼠行为学评估
4.3.4 免疫荧光染色
4.3.5 数据统计学处理
4.4 实验结果
4.4.1 外泌体的处理促进损伤脊髓再生
4.4.2 外泌体能够改善脊髓损伤大鼠的神经性疼痛和膀胱功能障碍
4.4.3 外泌体通过促进内源性神经干细胞的再生达到修复损伤的神经功能
4.5 小结
第五章 间充质干细胞过表达神经营养因子-3
引言
5.1 实验材料
5.2 实验方法
5.2.1 NT3过表达技术路线
5.2.2 人源NT-3基因克隆
5.2.3 pLVX-EF1a-IRES-meCherry-NT-3载体的构建
5.2.4 慢病毒包装
5.2.5 细胞感染
5.2.6 病毒的感染效率
5.2.7 过表达NT-3细胞鉴定
5.2.8 细胞流式分选
5.3 实验结果
5.3.1 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry质粒载体构建
5.3.2 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry质粒载体的表达
5.4 小结
第六章 结论与讨论
第七章 展望与挑战
致谢
参考文献
附录A 攻读硕士期间发表论文目录
本文编号：3701278
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3701278.html
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