颅脑手术废弃脑组织中成人自体神经干细胞培养、分化及鉴定

发布时间：2022-11-05 10:21

　　背景和目的神经干细胞（NSCs）具有自我更新和多向分化潜能。在疾病和损伤情况下,NSCs具有增殖、迁移,并向星形胶质细胞、少突胶质细胞和神经元分化的能力,已成为再生研究和神经功能损伤修复的热点,但由于免疫排斥问题及伦理方面的限制,其临床应用仍较困难。随着细胞生物学技术的发展,已经可以做到从胎鼠、成鼠及人类胚胎的多个区域分离得到NSCs,但鲜有文献报道从成人脑组织中获取NSCs。本课题通过改良原代培养方法在颅脑手术患者的废弃脑组织中分离培养NSCs,体外扩增后冻存,建立自体NSCs库;观察自体NSC的体外干性维持及谱系发育过程,并进行定向诱导分化研究,为术后神经功能缺失的颅脑损伤和脑卒中患者提供符合伦理要求的自体NSCs移植平台。方法（1）成人自体神经干细胞的改良原代培养:收集25例颅脑手术中废弃脑组织各约500 mg,用10ml注射器推出组织至培养皿,滴管轻柔吹打均匀至约10-500μm直径的组织碎片,离心（1000r/min,5min）弃上清,按1∶40（1 g组织:40 mL完全培养液）添加5 ml完全培养液(DMEM/F12、体积分数2%B₂₇、质量浓度20... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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缩略词表
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1.引言
2.材料与方法
    2.1 主要仪器设备
    2.2 实验试剂及材料
    2.3 试剂配制
    2.4 临床资料
    2.5 成人自体神经干细胞的改良培养与传代扩增
        2.5.1 成人自体神经干细胞的改良原代培养
        2.5.2 成人自体神经干细胞的传代扩增
    2.6 成人自体神经干细胞的诱导分化
    2.7 成人自体神经干细胞及诱导分化后细胞的鉴定
        2.7.1 成人自体神经干细胞免疫荧光鉴定
        2.7.2 成人自体神经干细胞诱导分化后细胞的免疫荧光鉴定
        2.7.3 成人自体神经干细胞及诱导分化后细胞蛋白质免疫印迹技术鉴定
    2.8 成人自体神经干细胞的冻存
    2.9 成人自体神经干细胞的复苏
3.结果
    3.1 废弃脑组织中成人自体神经干细胞球的生长情况
    3.2 成人自体神经干细胞的培养与传代扩增情况
        3.2.1 成人自体神经干细胞的原代培养结果
        3.2.2 成人自体神经干细胞的传代培养结果
    3.3 成人自体神经干细胞的诱导分化情况
    3.4 成人自体神经干细胞及诱导分化后细胞的鉴定结果
    3.5 成人自体神经干细胞的冻存
    3.6 成人自体神经干细胞的复苏后情况
4.讨论
结论
参考文献
个人简历
致谢
综述 神经干细胞的研究进展
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]颅内动脉瘤手术废弃脑组织中成人自体神经干细胞的培养与鉴定[J]. 王佳,赵全军,黑博,王兆涛,孙移坤,王涛,崔绍杰,王培新.  中国组织工程研究. 2018(21)
[2]神经干细胞治疗新生儿胆红素脑病的进展[J]. 李玲,李贵南.  转化医学杂志. 2017(03)
[3]人成体神经干细胞长期培养后遗传稳定性研究[J]. 陈世明,章瑾,王卓然,宣丹英,毛钟鸣,陈鹏翾.  中国医药生物技术. 2017(03)
[4]神经干细胞治疗胶质瘤的研究进展[J]. 罗林明,楚世峰,姜懿纳,罗飘,陈乃宏.  药学学报. 2017(04)
[5]一种长期培养人神经干细胞的新方法[J]. 陈世明,章瑾,宣丹英,毛钟鸣,陈鹏翾.  中国医药生物技术. 2017(02)
[6]神经干细胞的研究进展[J]. 杨瑞,吴晓君,贾微,岑妍慧.  大众科技. 2016(11)
[7]大鼠脑损伤海水浸泡后损伤脑组织小胶质细胞炎性改变[J]. 王伟,赵全军,刘爽,王涛,史铁钧,王淑为,郭欣茹.  中国神经免疫学和神经病学杂志. 2016(06)
[8]SD大鼠胚胎神经干细胞悬浮培养与鉴定[J]. 贺菊芳,余资江,朱晓瓞,方丽丽,王俊婕.  贵州医科大学学报. 2016(10)
[9]新生小鼠海马、嗅球及皮质神经干细胞的分离培养及鉴定[J]. 马浚宁,高俊玮,侯博儒,任海军,陈四化,刘吉星,严贵忠.  中国组织工程研究. 2014(45)
[10]运动训练对脑梗死大鼠侧脑室室管膜下区内源性神经干细胞迁移的影响及其机制[J]. 罗婧,胡昔权,张丽颖,李莉莉,郑海清,张青杰.  中国康复医学杂志. 2014(04)

硕士论文
[1]神经干细胞联合GABA能神经元移植治疗大鼠海水浸泡脑损伤的初步研究[D]. 王伟.南方医科大学 2017



本文编号：3702430