移植肝冷保存损伤机制的初步研究

发布时间：2023-01-30 12:32

　　背景对于终末期肝病患者来说,现阶段最有效的治疗手段是肝脏移植,随着外科技术的不断改良和免疫抑制剂的更新换代,肝移植患者远期存活率有所提高,但临床上仍有一定比例的患者会出现围手术期风险和术后肝脏原发性失功的情况,这是肝移植研究领域亟待解决的难题。冷缺血是移植肝在低温运输保存期间不可避免的损伤过程,其病理生理过程与术后肝脏功能恢复及远期预后密切相关。现阶段,对于肝移植的研究大多注重于移植后肝脏的缺血再灌注损伤,对于肝脏冷保存过程中发生的损伤变化及机制缺乏更为细致全面的研究。目的本实验通过对小鼠移植肝进行不同时间点的冷保存,观察肝脏发生的病理学改变和超微结构变化,并对肝功能及其相关损伤指标,如AST、ALT、MDA、GS、HIF-1α、AQP8和KLF2及其下游基因eNOS进行检测。试图揭示移植肝随着冷保存时间的延长相继出现的损伤及其背后的分子机制,对深入了解移植肝冷保存损伤的变化过程及保存措施的研发有着重要的基础研究意义和临床应用价值。方法（1）建立小鼠肝移植冷保存动物模型:取健康的雄性C57BL/6小鼠20只,周龄:8周,随机分为4组。原位灌流摘取肝脏后,分别冷保存3个时间点:（1）正常... 

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
(一) 前言
(二) 材料和方法
    1.实验材料
        1.1 动物实验
        1.2 主要实验仪器
        1.3 主要试剂
    2.实验方法
        2.1 主要溶液配制
        2.2 动物实验
        2.3 肝组织病理制备
        2.4 肝组织电镜样品制备
        2.5 肝组织总蛋白提取
        2.6 BCA法蛋白浓度测定
        2.7 蛋白免疫印迹实验
        2.8 动物组织RNA提取
        2.9 cDNA合成
        2.10 实时荧光定量PCR
        2.11 肝脏功能检测
        2.12 丙二醛(MDA) 含量检测
        2.13 糖原(PAS) 染色实验
        2.14 统计学处理
(三) 结果
    1.移植肝冷保存损伤的形态学变化
    2.冷保存过程中小鼠肝脏再灌流液中谷丙转氨酶(ALT) 、谷草转氨酶(AST) 及肝脏组织中丙二醛(MDA) 的表达变化
    3.冷保存过程中小鼠肝脏切片糖原(PAS) 染色及小鼠肝组织糖原合成酶GSmRNA水平表达变化
    4.冷保存过程中小鼠肝脏KLF2、eNOSmRNA水平表达变化
    5.冷保存过程中小鼠肝脏HIF-1αmRNA水平表达变化
    6.冷保存过程中小鼠肝脏AQP8蛋白水平表达变化
(四) 讨论
(五) 结论
(六) 参考文献
综述
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Liver transplantation: Current status and challenges[J]. Caroline C Jadlowiec,Timucin Taner.  World Journal of Gastroenterology. 2016(18)
[2]硫化物急性毒性对曼氏无针乌贼幼体血液生理生化指标的影响[J]. 尹飞,彭士明,范帆,孙鹏,施兆鸿.  安全与环境学报. 2011(04)
[3]Hypoxia inducible factor-1αaccumulation in steatotic liver preservation:Role of nitric oxide[J]. Mohamed Amine Zaouali,Ismail Ben Mosbah,Eleonora Boncompagni,Hassen Ben Abdennebi,Maria Teresa Mitjavila,Ramon Bartrons,Isabel Freitas,Antoni Rimola,Joan Roselló-Catafau.  World Journal of Gastroenterology. 2010(28)
[4]水通道蛋白的表达及其调节[J]. 安宇,张剑钊,李学军.  国际药学研究杂志. 2008(05)
[5]Hypoxia inducible factor-1α mediates protective effects of ischemic preconditioning on ECV-304 endothelial cells[J]. Liu-Bin Shi, Jian-Hua Huang, Bao-San Han Department of Organ Transplantation, Huashan Hospital, Fudan University, Shanghai 200040, China Institute of Integrative Medicine, Huashan Hospital, Fudan University, Shanghai 200040, China Department of General Surgery, Ruijin Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200025, China.  World Journal of Gastroenterology. 2007(16)

硕士论文
[1]去铁敏对大鼠离体心脏STHⅡ液冷保存的影响及HIF-1α基因在其中的作用[D]. 胡许平.泸州医学院 2014



本文编号：3733076