脑源性微粒在颅脑创伤后血管痉挛中的作用研究
发布时间：2023-04-25 05:22
目的:创伤性颅脑损伤(Traumatic Brain Injury,TBI)后脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)是TBI后的严重并发症之一,是引起TBI后脑缺血、脑梗死等继发性脑损伤和致死致残的重要原因,但目前仍尚不清楚其具体发病机制。本课题组前期研究证实小鼠TBI后可释放脑源性微粒通过破坏的血脑屏障释放入外周循环血中,且鼠尾静脉注射一定数量脑源性微粒可导致小鼠死亡,但病理尸检未发现死亡小鼠存在器质性致死原因,故推测其致死原因为血管痉挛等功能性改变。本研究将在前期研究基础上,继续研究脑源性微粒在小鼠TBI后脑血管痉挛中的作用,检测其对平滑肌细胞、内皮细胞等血管构成细胞胞内钙离子浓度的作用及脑血流量的影响,同时检测钙离子拮抗剂尼莫地平对脑源性微粒介导的脑血管痉挛的治疗作用。本研究将阐明TBI后脑血管痉挛的早期发生机制,丰富TBI后脑血管痉挛的病生理机制理论,为TBI后脑血管痉挛的诊疗提供新思路和理论依据。方法:(1)体外制备脑源性微粒并进行电镜及粒径鉴定,鼠尾静脉注射后测定其半数致死剂量,为后续体内外深入研究脑源性微粒的病生理机制提供可靠有效的基础数据。(2)体外...
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
研究现状、成果
研究目的、方法
一、鼠尾静脉注射脑源性微粒后半数致死剂量的测定
1.1 对象和方法
1.1.1 实验动物及试剂
1.1.2 实验仪器
1.1.3 脑源性微粒的制备、鉴定、计数方法、粒径鉴定和质谱分析
1.1.4 磷脂微粒的制备方法和电镜鉴定
1.1.5 SDS处理脑源性微粒的方法和电镜鉴定
1.1.6 鼠尾静脉注射脑源性微粒的预试验方法
1.1.7 鼠尾静脉注射BDMP、磷脂微粒和SDS处理后BDMP后的临床表和正式试验
1.1.8 统计学分析
1.2 结果
1.2.1 BDMP、磷脂微粒和SDS处理后BDMP的电镜鉴定；BDMP的粒径鉴定及质谱分析
1.2.2 脑源性微粒的计数
1.2.3 鼠尾静脉注射脑源性微粒、磷脂微粒和SDS处理后脑源性微粒的临床表现
1.2.4 不同时间点老鼠的死亡情况
1.2.5 半数致死量计算结果
1.3 讨论
1.4 小结
二、脑源性微粒收缩颈总动脉导致脑血流量下降的研究
2.1 对象和方法
2.1.1 实验动物及试剂
2.1.2 实验仪器
2.1.3 脑源性微粒的制备方法和计数
2.1.4 小鼠颈总动脉的分离、固定和预处理
2.1.5 脑源性微粒对内皮完整的颈总动脉收缩功能的影响
2.1.6 脑源性微粒对小鼠脑血流灌注量的影响
2.1.7 统计学分析
2.2 结果
2.2.1 脑源性微粒可导致内皮完整的颈总动脉收缩
2.2.2 鼠尾静脉注射脑源性微粒可导致脑血流灌注量降低，而鼠尾静脉注射磷脂微粒和SDS处理后的脑源性微粒未引起脑血流灌注量降低
2.3 讨论
2.4 小结
三、星形胶质细胞来源微粒细胞内游离钙离子的影响
3.1 对象和方法
3.1.1 实验动物及试剂
3.1.2 实验仪器
3.1.3 原代星形胶质细胞的培养
3.1.4 星形胶质细胞来源微粒的提取、鉴定和计数
3.1.5 大鼠脑动脉平滑肌细胞的培养和实验分组
3.1.6 人脐静脉内皮细胞的培养和实验分组
3.1.7 激光共聚焦显微镜观察星形胶质细胞来源微粒对平滑肌细胞和脐静脉内皮细胞游离钙离子的荧光强度
3.1.8 流式细胞术检测星形胶质细胞来源微粒对平滑肌细胞和脐静脉内皮细胞内游离钙离子的荧光强度值
3.1.9 膜片钳技术检测脑源性微粒对平滑肌细胞钙离子通道的影响
3.1.10 统计学分析
3.2 结果
3.2.1 原代星形胶质细胞、平滑肌细胞、脐静脉内皮细胞的培养和鉴定
3.2.2 星形胶质细胞来源微粒的电镜鉴定和计数
3.2.3 激光共聚焦显微镜观察各组细胞内游离钙离子的荧光强度
3.2.4 流式细胞术检测各组细胞内游离钙离子的荧光强度值
3.2.5 全细胞膜片钳记录模式检测可见脑源性微粒促进平滑肌细胞L型电压门控性钙离子通道开放
3.3 讨论
3.4 小结
四、体外细胞实验证实脑源性微粒对细胞形态、骨架及蛋白表达的影响
4.1 对象和方法
4.1.1 实验动物及试剂
4.1.2 主要仪器
4.1.3 脑源性微粒的制备及平滑肌细胞、脐静脉内皮细胞的培养
4.1.4 离子电导显微镜观察脑源性微粒对平滑肌细胞形态的影响
4.1.5 离子电导显微镜观察脑源性微粒对脐静脉内皮细胞形态的影响
4.1.6 共聚焦显微镜观察脑源性微粒对平滑肌细胞骨架影响
4.1.7 共聚焦显微镜观察脑源性微粒对脐静脉内皮细胞骨架影响
4.1.8 流式细胞技术检测平滑肌细胞吞噬微粒的能力
4.1.9 蛋白免疫印迹检测脑源性微粒处理平滑肌细胞后收缩相关蛋白表达的变化
4.1.10 统计学分析
4.2 结果
4.2.1 脑源性微粒对平滑肌细胞的高度和表面粗糙度的影响
4.2.2 脑源性微粒对脐静脉内皮细胞的高度和表面粗糙度的影响
4.2.3 脑源性微粒对平滑肌细胞和脐静脉内皮细胞骨架结构的影响
4.2.4 随着时间的延长，平滑肌细胞吞噬脑源性微粒的数量增多
4.2.5 脑源性微粒可促进平滑肌细胞肌球蛋白磷酸化表达
4.3 讨论
4.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 颅脑创伤后脑血管痉挛的研究进展
综述参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3800792
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
研究现状、成果
研究目的、方法
一、鼠尾静脉注射脑源性微粒后半数致死剂量的测定
1.1 对象和方法
1.1.1 实验动物及试剂
1.1.2 实验仪器
1.1.3 脑源性微粒的制备、鉴定、计数方法、粒径鉴定和质谱分析
1.1.4 磷脂微粒的制备方法和电镜鉴定
1.1.5 SDS处理脑源性微粒的方法和电镜鉴定
1.1.6 鼠尾静脉注射脑源性微粒的预试验方法
1.1.7 鼠尾静脉注射BDMP、磷脂微粒和SDS处理后BDMP后的临床表和正式试验
1.1.8 统计学分析
1.2 结果
1.2.1 BDMP、磷脂微粒和SDS处理后BDMP的电镜鉴定；BDMP的粒径鉴定及质谱分析
1.2.2 脑源性微粒的计数
1.2.3 鼠尾静脉注射脑源性微粒、磷脂微粒和SDS处理后脑源性微粒的临床表现
1.2.4 不同时间点老鼠的死亡情况
1.2.5 半数致死量计算结果
1.3 讨论
1.4 小结
二、脑源性微粒收缩颈总动脉导致脑血流量下降的研究
2.1 对象和方法
2.1.1 实验动物及试剂
2.1.2 实验仪器
2.1.3 脑源性微粒的制备方法和计数
2.1.4 小鼠颈总动脉的分离、固定和预处理
2.1.5 脑源性微粒对内皮完整的颈总动脉收缩功能的影响
2.1.6 脑源性微粒对小鼠脑血流灌注量的影响
2.1.7 统计学分析
2.2 结果
2.2.1 脑源性微粒可导致内皮完整的颈总动脉收缩
2.2.2 鼠尾静脉注射脑源性微粒可导致脑血流灌注量降低，而鼠尾静脉注射磷脂微粒和SDS处理后的脑源性微粒未引起脑血流灌注量降低
2.3 讨论
2.4 小结
三、星形胶质细胞来源微粒细胞内游离钙离子的影响
3.1 对象和方法
3.1.1 实验动物及试剂
3.1.2 实验仪器
3.1.3 原代星形胶质细胞的培养
3.1.4 星形胶质细胞来源微粒的提取、鉴定和计数
3.1.5 大鼠脑动脉平滑肌细胞的培养和实验分组
3.1.6 人脐静脉内皮细胞的培养和实验分组
3.1.7 激光共聚焦显微镜观察星形胶质细胞来源微粒对平滑肌细胞和脐静脉内皮细胞游离钙离子的荧光强度
3.1.8 流式细胞术检测星形胶质细胞来源微粒对平滑肌细胞和脐静脉内皮细胞内游离钙离子的荧光强度值
3.1.9 膜片钳技术检测脑源性微粒对平滑肌细胞钙离子通道的影响
3.1.10 统计学分析
3.2 结果
3.2.1 原代星形胶质细胞、平滑肌细胞、脐静脉内皮细胞的培养和鉴定
3.2.2 星形胶质细胞来源微粒的电镜鉴定和计数
3.2.3 激光共聚焦显微镜观察各组细胞内游离钙离子的荧光强度
3.2.4 流式细胞术检测各组细胞内游离钙离子的荧光强度值
3.2.5 全细胞膜片钳记录模式检测可见脑源性微粒促进平滑肌细胞L型电压门控性钙离子通道开放
3.3 讨论
3.4 小结
四、体外细胞实验证实脑源性微粒对细胞形态、骨架及蛋白表达的影响
4.1 对象和方法
4.1.1 实验动物及试剂
4.1.2 主要仪器
4.1.3 脑源性微粒的制备及平滑肌细胞、脐静脉内皮细胞的培养
4.1.4 离子电导显微镜观察脑源性微粒对平滑肌细胞形态的影响
4.1.5 离子电导显微镜观察脑源性微粒对脐静脉内皮细胞形态的影响
4.1.6 共聚焦显微镜观察脑源性微粒对平滑肌细胞骨架影响
4.1.7 共聚焦显微镜观察脑源性微粒对脐静脉内皮细胞骨架影响
4.1.8 流式细胞技术检测平滑肌细胞吞噬微粒的能力
4.1.9 蛋白免疫印迹检测脑源性微粒处理平滑肌细胞后收缩相关蛋白表达的变化
4.1.10 统计学分析
4.2 结果
4.2.1 脑源性微粒对平滑肌细胞的高度和表面粗糙度的影响
4.2.2 脑源性微粒对脐静脉内皮细胞的高度和表面粗糙度的影响
4.2.3 脑源性微粒对平滑肌细胞和脐静脉内皮细胞骨架结构的影响
4.2.4 随着时间的延长，平滑肌细胞吞噬脑源性微粒的数量增多
4.2.5 脑源性微粒可促进平滑肌细胞肌球蛋白磷酸化表达
4.3 讨论
4.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 颅脑创伤后脑血管痉挛的研究进展
综述参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3800792
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