GSK-3β调节自噬影响DCD供肝缺血再灌注损伤机制的研究

发布时间：2023-04-30 05:56

　　目的:肝移植是治疗终末期肝病的唯一有效手段。但是,供肝的短缺制约肝移植手术,亦使很多病人在等待移植期间死亡。在我国,由于没有脑死亡标准的法律规定,因此心脏死亡供者(donors of cardiac death,DCD)将成为我国器官捐献最主要的来源。DCD相对于脑死亡供者(donors after brain death,DBD)经历了热缺血损伤,更易于出现早期移植物功能不良(poor early graft function,PEGF)、原发性移植物无功能(primary non-function,PNF)以及缺血性胆道疾病等,导致移植物的长期存活率下降,影响肝移植病人的预后。所以,如何评估与改善供器官质量是移植研究的重要课题。缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion?injury,IRI)是肝移植术后导致肝内胆管疾病和移植物丢失的主要原因。如何减轻IRI、提高器官利用率、扩大移植物来源、降低术后并发症、改善移植受者生存质量是目前DCD肝移植的研究热点。关于IRI发生的机制,目前研究比较明确的有:氧自由基爆发、细胞内钙超载、炎症反应等,最新的研究表明,细胞自噬也参与...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :DCD肝移植中GSK-3β表达及肝细胞自噬的变化规律及意义
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 大鼠DCD肝移植模型的建立
            2.3.2 巴马小型猪DCD肝移植
            2.3.3 组织形态学检查
            2.3.4 蛋白免疫印迹法检测肝组织LC3、p62、AMPK的表达
            2.3.5 血清酶学
    3 结果
        3.1 大鼠DCD肝移植检测指标的结果
            3.1.1 组织形态学
            3.1.2 蛋白免疫印迹法检测肝组织LC3、p62、AMPK的表达
            3.1.3 血清酶学
        3.2 猪DCD肝移植检测指标的结果
            3.2.1 组织形态学
            3.2.2 蛋白免疫印迹法检测肝组织LC3、p62、AMPK的表达
            3.2.3 血清酶学
    4 讨论
    5 小结
第二部分 :GSK-3β调控细胞自噬对IRI肝细胞活性的影响及途径
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂及实验仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 细胞培养
            2.3.2 细胞转染
            2.3.3 肝细胞无氧-复氧培养
            2.3.4 蛋白免疫印迹法检测不同功能的GSK-3β影响L02 肝细胞LC3、p62、AMPK的表达
            2.3.5 免疫荧光检测不同功能的GSK-3β影响L02 肝细胞LC3、p62、AMPK的表达
            2.3.6 MTS法检测不同功能的GSK-3β对L02 肝细胞活性的影响
    3 结果
        3.1 不同功能的GSK-3β影响L02 肝细胞LC3、p62、AMPK的表达
            3.1.1 Western Blot检测自噬相关蛋白表达变化
            3.1.2 免疫荧光检测自噬相关蛋白表达变化
        3.2 不同功能的GSK-3β对L02 肝细胞活性的影响
    4 讨论
    5 小结
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    1.自噬
    2.自噬与肝脏缺血再灌注损伤
    3.小结
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3806564