容积敏感性LRRC8A氯离子通道调控软骨细胞Ⅱ型胶原的作用机制

发布时间：2023-05-11 04:39

　　目的:探讨容积敏感性LRRC8A氯离子通道在正常和OA软骨细胞中的表达情况,分析LRRC8A离子通道的激活和表达水平对及II型胶原蛋白表达的影响,为氯离子通道型的抗骨性关节炎药物的研发提供新的实验依据。方法:从患者术后的股骨头和膝关节中提取相对正常的软骨细胞和骨性关节炎的软骨细胞,甲苯胺蓝染色初步鉴定所培养的细胞是否为软骨细胞。通过q PCR和免疫荧光实验比较股骨颈骨折患者和骨性关节炎患者的软骨细胞中COL II和LRRC8A氯通道的m RNA水平。使用氯离子通道阻断剂NPPB、LRRC8A-si RNA和不同渗透压培养液分别处理软骨细胞后,检测COL II和LRRC8A基因的m RNA水平。结果:从患者处获得的软骨细胞甲苯胺蓝染色实验结果为阳性,初步鉴定我们所培养的细胞为软骨细胞。股骨颈骨折患者软骨细胞COL II mRNA和LRRC8A mRNA表达量分别为(1.004±0.082)、(1.002±0.057)。OA患者软骨细胞中COL II、LRRC8A基因m RNA水平分别为对照组的(0.27±0.06)倍、(1.998±0.141)倍。OA患者软骨细胞中COL II基因m R...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词
第1章 绪论
    1.1 引言
    1.2 国内外研究现状
    1.3 本实验研究的内容和意义
第2章 材料与试剂
    2.1 软骨细胞
    2.2 试剂及耗材
    2.3 主要仪器
    2.4 试剂的配制
第3章 方法
    3.1 软骨细胞的分离和培养
    3.2 LRRC8A-siRNA细胞转染
    3.3 免疫荧光染色
    3.4 软骨细胞的甲苯胺蓝染色鉴定
    3.5 对软骨细胞进行不同渗透压培养
    3.6 使用NPPB阻断软骨细胞中氯离子通道
    3.7 RT-qPCR
    3.8 统计学分析
第4章 结果
    4.1 培养后的软骨细胞甲苯胺蓝染色鉴定
    4.2 正常软骨细胞和OA软骨细胞中COL II基因的表达差异
    4.3 LRRC8A氯离子通道在正常软骨细胞和OA软骨细胞中的表达差异
    4.4 氯通道阻滞剂处理后,软骨细胞COL II基因mRNA减少
    4.5 不同渗透压培养下软骨细胞基因的表达差异
    4.6 LRRC8A-siRNA转染后,软骨细胞相关基因的mRNA表达差异
    4.7 调节渗透压和使用NPPB阻断氯通道后,软骨细胞COLⅡ基因的mRNA表达差异
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
附录
文献综述
    参考文献
致谢



本文编号：3814178