尿源性干细胞的外泌体复合光致亚胺交联水凝胶修复骨不连的作用研究

发布时间：2023-05-21 19:12

　　背景:骨不连是创伤骨科中困扰临床的并发症之一,目前自体骨移植等临床主要治疗方法的治愈率难以令人满意,严重影响患者的生活质量。近年来随着组织工程技术研究的深入,干细胞疗法受到越来越多的关注,但仍有伦理、致畸等风险。外泌体是细胞分泌的囊泡,内含核酸、蛋白质等物质以完成细胞间信息传递,研究证实外泌体可以发挥与源细胞类似的作用。本研究借助一种与骨组织有特殊亲和力的水凝胶(piGEL)为载体,搭载尿源性干细胞来源的外泌体(USC-Exos),构成凝胶外泌体复合体(USC-Exos-piGEL)通过体内体外实验验证该复合体对骨不连的治疗效果。方法:本研究利用课题组前期建立的实验技术,从人尿液中提取并培养尿源性干细胞(USC),通过超滤法提取其分泌的外泌体(USC-exos)用于研究。(1)通过TEM观察USC-exos的形态、大小,通过qNANO技术测定外泌体粒径和外泌体悬液的浓度。(2)通过CCK-8细胞增殖实验、划痕实验、transwell实验、成管实验在体外验证USC-exos对人脐静脉血管内皮细胞HuVECs的促进增殖、迁移、成管的作用。(3)在体外构建USC-Exos-piGEL复合体,...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩写词对照表
绪论
第一部分 尿源性干细胞外泌体的分离与鉴定
    1.1 材料与方法
        1.1.1 材料与仪器
        1.1.2 尿源性干细胞(USC)的分离与培养
        1.1.3 尿源性干细胞外泌体(USC-Exos)的分离
        1.1.4 USC-Exos的形态、粒径测定
    1.2 结果
        1.2.1 TEM电镜下USC-Exos的形态特征
        1.2.2 qNANO检测USC-Exos的粒径和浓度
    1.3 本节结论与讨论
第二部分 尿源性干细胞外泌体体外促进血管再生
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料与仪器
        2.1.2 人脐静脉内皮细胞(HuVECs)的培养
        2.1.3 USC-Exos促进HuVECs增殖作用
        2.1.4 USC-Exos促进HuVECs迁移作用
        2.1.5 USC-Exos促进HuVECs成管作用
    2.2 结果
        2.2.1 USC-Exos体外促进HuVECs增殖
        2.2.2 USC-Exos体外促进HuVECs迁移
        2.2.3 USC-Exos体外促进HuVECs成管
    2.3 本节结论与讨论
第三部分 光致亚胺交联凝胶(piGEL)制备及凝胶-外泌体复合体(USC-Exos-piGEL)的构建
    3.1 材料与方法
        3.1.1 USC-Exos-piGEL的制备
        3.1.2 USC-Exos-piGEL体外释放外泌体浓度测定
    3.2 结果
    3.3 本节结论与讨论
第四部分 USC-Exos-piGEL体内促进股骨骨不连修复
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料与仪器
        4.1.2 大鼠股骨骨不连模型建立与干预
        4.1.3 影像学评估股骨骨不连修复情况
        4.1.4 血管灌注法评估股骨骨不连周围血供再生情况
        4.1.5 组织学评估股骨骨不连修复情况
        4.1.6 组织切片免疫荧光评估骨不连周围血管再生情况
    4.2 结果
        4.2.1 影像学评估大鼠股骨骨不连修复情况
        4.2.2 血管灌注法评估股骨骨不连周围血供再生情况
        4.2.3 组织学评估股骨骨不连修复情况
        4.2.4 股骨肥大型骨不连修复的免疫组织化学表现
    4.3 本节结论与讨论
讨论
全文结论
参考文献
致谢
硕士期间论文发表情况及获奖情况



本文编号：3821288