以脂肪血管基质成分为基础构建组织工程软骨修复山羊膝关节大面积软骨缺损

发布时间：2023-10-06 18:55

　　目的:探究采用软骨细胞外基质源性微粒(Cartilage ECM derived particles,CEDPs)及PCL支架作为载体,复合自体脂肪组织来源的血管基质成分(Stromal Vascular Fraction,SVF)构建组织工程软骨修复山羊膝关节负重区软骨大面积缺损的可行性。方法:使用3-D打印技术制备多孔的聚己内酯(PCL)支架。无菌环境下刮取山羊膝关节处软骨碎片,通过粉碎、逐步脱细胞等技术,制备山羊软骨来源的细胞外基质源性微粒。在体外对支架和软骨细胞外基质源性微粒进行微观形态学检测,并复合细胞,观察材料对细胞生长及分化的影响。无菌条件下取山羊颈背部皮下脂肪,利用酶消法获得自体脂肪来源SVF。体外验证其具有多项分化能力。手术时,在山羊右膝关节内外侧股骨髁负重区分别建立一个直径8mm的全层软骨缺损。实验分为5组,每组4只山羊(8个缺损区),分别为A组:空白对照组;B组:CEDPs组;C组:CEDPs+SVF组(微组织组);D组:PCL组;E组:PCL+微组织组。A、B、C组在术后3个月和6个月各取2只,D、E两组在术后6个月进行取材。分别使用国际软骨修复协会大体评分标准...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 利用细胞外基质源性微粒复合脂肪组织来源的血管基质成分修复山羊膝关节大面积软骨缺损
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂和仪器
            1.1.1 主要试剂
            1.1.2 主要仪器
        1.2 实验动物
        1.3 实验方法
            1.3.1 软骨细胞外基质源性微粒(CEDPs)的制备
            1.3.2 脱细胞后的CEDPs的特征观察
            1.3.3 山羊自体脂肪SVF的获取
            1.3.4 山羊自体脂肪SVF的三系诱导
            1.3.5 SVF与 CEDPs的共培养
            1.3.6 CEDPs复合SVF修复山羊膝关节负重区软骨缺损
            1.3.7 标本MRI观察分析
            1.3.8 标本大体观察
            1.3.9 标本组织学分析
            1.3.10 新生组织糖胺聚糖含量测定
            1.3.11 新生组织生物力学检测
            1.3.12 统计学方法
    2 结果
        2.1 脱细胞后的CEDPs的特征观察
        2.2 山羊自体SVF的细胞培养及传代
        2.3 SVF的成脂、成骨、成软骨三系分化诱导
        2.4 SVF与 CEDPs共培养
        2.5 标本大体观察
        2.6 标本MRI检查
        2.7 组织学分析与评分
        2.8 糖胺聚糖含量测定结果
        2.9 生物力学分析与评分
    3 讨论
    4 结论
第二部分 3D打印PCL支架复合SVF构建组织工程软骨修复山羊膝关节大面积软骨缺损
    1 材料和方法
        1.1 主要试剂和仪器
            1.1.1 主要试剂
            1.1.2 主要仪器
        1.2 实验动物
        1.3 实验方法
            1.3.1 3D打印PCL支架的制备
            1.3.2 PCL支架的特性和细胞相容性检测
            1.3.3 修复山羊膝关节负重区软骨缺损
            1.3.4 标本MRI观察分析
            1.3.5 标本大体观察
            1.3.6 标本组织学分析
            1.3.7 标本生物力学分析
            1.3.8 统计学方法
    2 结果
        2.1 PCL支架的形态及细胞相容性
        2.2 标本大体观察
        2.3 标本MRI观察
        2.4 组织学分析与评分
        2.5 生物力学分析与评分
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
附录一
附录二
致谢
个人简介



本文编号：3852278