过表达CCND1促进成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞的研究

发布时间：2024-02-15 02:47

　　目的:(1)表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)的分离、培养和鉴定。(2)探索通过过表达细胞周期蛋白D1(CCND1)诱导成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞,观察去分化后细胞的形态、表型、增殖情况的改变。(3)探索过表达CCND1诱导后的表皮细胞对裸鼠皮肤创面修复的促进作用。方法:(1)取包皮过长病人术后的新鲜成人包皮组织,去除皮下的软组织。分别经分解酶(DispaseⅡ)和胰蛋白酶消化,200目滤网过滤。用Epilife完全培养基将分离的细胞重悬,接种于Ⅳ型胶原包被的培养瓶中。30min后换液,PBS冲洗掉尚未贴壁的表皮细胞,重新加入Epilife培养基放入培养箱培养。免疫细胞荧光技术检测该细胞的表皮干细胞抗体CK19、β1和成熟表皮细胞抗体CK10的表达情况。(2)将质粒PEGFP-N1和细胞周期蛋白D1(CCND1)基因合成表达质粒PEGFP-N1-CCND1,并通过Lipofectamine?2000转染成熟表皮细胞,造成成熟表皮细胞CCND1基因过表达。设PEGFP-N1-CCND1转染后的表皮细胞为实验组,表皮干细胞为阳性对照组,空载体PEGFP-N...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1为表皮干细胞的生长状态

天津医科大学硕士学位论文一、表皮干细胞的分离、培养和鉴定录下来。1.2结果1.2.1表皮干细胞的形态和生长状态观察刚贴壁的表皮干细胞呈团块状生长，3-4天后团块开始融合连成一片。表皮干细胞胞体较小，胞核大，呈椭圆形，颜色略深。表皮干细胞生长迅速，25cm2培养瓶5-7....

图1.2免疫细胞荧光技术检测表皮干细胞和成熟表皮细胞的抗体β1、CK19和ck10的表达情况（标尺为1：50μm，DAPI染核，AlexaFluor568标记一抗）

图1.2免疫细胞荧光技术检测表皮干细胞和成熟表皮细胞的抗体β1、CK19和ck10的表达情况（标尺为1：50μm，DAPI染核，AlexaFluor568标记一抗）。A为表皮干细胞的β1免疫荧光；B为表皮干细胞的CK19的免疫荧光；C为ck10的....

图2.1目的基因的的测序鉴定结果

天津医科大学硕士学位论文二、过表达CCND1诱导成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞查出的CCND1（基因号：BC014078）的序列一致。

图2.2转染后各组细胞的形态变化（标尺为1：100μm）

染细胞数量的4倍，但与表皮干细胞数量相当。表2.1培养5d后各组细胞的数量分组细胞的数量（×105）实验组阳性对照组阴性对照组24±2**6±125±2****p<0.01vs阴性对照组2.2.3细胞周期蛋白D1诱导去分化后表皮细胞形态变化表皮干细胞离体培....

本文编号：3899066