内质网应激活化caspase依赖性凋亡通路参与骨癌痛机制研究

发布时间：2024-02-22 19:51

　　目的:骨癌疼痛(bone cancer pain,BCP)由于其复杂的机制而难以治疗,因而严重的影响了患者的日常生活质量。最近的研究表明内质网应激参与了许多与疼痛相关的通路。然而,内质网应激的相关因素及其与骨癌痛的关系尚不清楚。本研究目的旨在探讨内质网应激反应在骨癌痛中的作用及其机制。方法:采用成年雌性SD大鼠胫骨髓腔接种Walker 256乳腺癌细胞制备骨癌痛模型,疼痛行为学检测采用大鼠左侧后肢足底部纤毛机械刺激针方法(PWT)衡量骨癌痛阈值。通过蛋白质免疫印迹检测技术,定量检测免疫球蛋白结合蛋白/葡萄糖调节蛋白78(BIP/GRP78)、活化转录因子-6(ATF6)、磷酸化肌醇需求酶-1(p-IRE1)、磷酸化蛋白激酶RNA样ER激酶(p-PERK)等内质网应激标志物以及凋亡标记蛋白cleaved caspase-3的表达水平。运用免疫荧光技术检测脊髓腰膨大组织的切片中内质网应激的标记蛋白(p-e IF2α)和cleaved caspase-3的细胞定位。Tunel染色用于验证脊髓背角组织中神经元的凋亡发生。结果:骨癌痛模型大鼠发生持续性机械性疼痛,并且脊髓背角组织中GRP78、A...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1所示：BCP大鼠左侧胫骨接种肿瘤后发生的行为学和组织化学分析

瘤细胞浸润。总的来说，组织病理学检查结果显示，髓内接种9d后肿瘤细胞明显侵犯正常骨结构，与此相反，术后第9天接种热杀死Walker256乳腺癌细胞的大鼠胫骨则未见明显的骨质损伤（图1B）。

图2所示：骨癌痛大鼠造模后第9天，脊髓组织Tunel染色结果，荧光显微镜下组织切片上凋亡的细胞呈红色荧光，细胞核呈蓝色荧光，标尺100um，箭头指处：Tunel与DAPI共表达

23相比；单因素方差分析和Bonferroni检验；n=10)。(B)肿瘤细胞接种后第9天，左侧胫骨标本经苏木精染色、伊红染色，病理切片蓝色箭头显示大量细胞浸润髓腔。2.内质网应激标志物和cleaved-caspase-3在骨癌痛大鼠的脊髓背角组织中持续表达上调。一方面，在本研究....

图3所示：Westernblot分析内质网应激标记蛋白(GRP78、ATF6、p-IRE1、p-PERK)表达变化及caspase-3a在脊髓背角组织随时间变化的水平

24图3所示：Westernblot分析内质网应激标记蛋白(GRP78、ATF6、p-IRE1、p-PERK)表达变化及caspase-3a在脊髓背角组织随时间变化的水平。BCP大鼠脊髓中ER应激标志物和caspase-3a表达增强。与Sham组相比，BCP组脊髓背角组织中的GR....

图4所示：免疫荧光显示caspase-3a定位于脊髓背角组织

25组大鼠和骨癌痛组大鼠的脊髓腰膨大组织的切片，并且进行观察了caspase-3a与神经元的特异性标记蛋白(NeuN)，星形胶质细胞的特异性标记蛋白(GFAP)，和小胶质细胞的特异性标记蛋白(IBA-1)荧光共定位情况。如图4所示，caspase-3a，作为凋亡的标志蛋白，主要定....

本文编号：3907171