靶向CaMK Ⅱ基因在大鼠肝脏移植术后细胞凋亡的研究

发布时间：2024-03-30 13:20

　　[目的]本研究分为两个部分,第一部分探讨CaMKⅡ表达调控对大鼠肝胞BRL-3A凋亡的影响;第二部分探讨CaMK Ⅱ表达调控对大鼠肝移植术后肝功能及细胞凋亡的影响。[方法](1)通过培养稳定传代的大鼠肝细胞BRL-3A系,并构建CaMKⅡ γ shRNA(A组)和CaMKⅡ γ蛋白(B组)的慢病毒表达体系,转入大鼠肝细胞BRL-3A内,同时予以灌注相应的空白载体(C组、D组)及空白对照(E组)形成对照,通过Western blot法检测各组CaMKⅡ、CytC、AIF蛋白的表达,并通过Tunel法检测大鼠肝细胞BRL-3A凋亡率。(2)采用经典二袖套法建立SD至SD大鼠同种异体原位肝移植模型,分别将表达CaMKⅡγ shRNA的慢病毒载体(A组)及表达CaMKⅡγ蛋白的慢病毒载体(B组)转染至肝移植术后大鼠体内,同时予以灌注相应的空载体(C组、D组)及生理盐水(E组)形成对照,分别于术后不同时间点取大鼠下腔静脉血测定检测各组ALT、AST水平,同时取大鼠肝组织测定CaMKⅡ、Cyt C、AIF蛋白的表达量和肝细胞凋亡率。[结果](1)在体外实验中,灌注CaMKⅡ γ shRNA慢病毒组...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图..白日目.口7CC1侧目曰.的.川曰MN日旧.

适当旋松瓶盖；??（８）置３７°Ｃ、饱和湿度、５％Ｃ０２孵箱中培养，传代后的细胞在６－８ｈ便可贴壁生??长，２４ｈ后更换一次培养液。??２．１．?４?ＢＲＬ－３Ａ细胞生长曲线的研究??调整细胞密度为３２Ｘ１０１个／ｍｌ，倍比稀释９个浓度至０．?１２５Ｘ１０４个／ｍｌ，接??种到９....

图1BRL-3A细胞不同时间点增殖传代(100X)

图２不同接种浓度的ＢＲＬ－３Ａ细胞生长曲线（ｘ±ｓ，?ｎ＝１２）??２２??

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图３?ＬＶ－ＣａＭＫ?ＩＩ?ｙ组慢病毒感染ＢＲＬ－３Ａ细胞４８ｈ绿色荧光的表达（２００Ｘ?）??

２．慢病毒滴度测定结果??将构建好的慢病毒载体转染２９３Ｔａ细胞，收取转染４８ｈ后病毒上清培养液，??并进行浓缩，检测各组病毒滴度分别为：ＬＶ－ＣａＭＫｌＩｙ组慢病毒滴度＝３．８２Ｘ??１０８ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ；?ＬＶ－ＮＣ?组慢病毒滴度＝１．?２９Ｘ?１０８ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ；....

本文编号：3942416