丝胶支架搭载miR29-EVs处理过的原代成肌细胞用于骨骼肌损伤修复的研究

发布时间：2024-04-16 03:59

　　目的:评价丝胶支架搭载mi R29-EVs处理过的原代成肌细胞治疗严重骨骼肌损伤的修复效果。方法:我们提取并鉴定了原代成肌细胞。制备了丝胶支架,研究了其对原代成肌细胞和成纤维细胞的作用。提取和鉴定了mi R29-EVs,并体外验证了mi R29-EVs对原代成肌细胞的作用。注射CTX造成C57/BL6小鼠胫骨前肌严重损伤,损伤早期(损伤后2周和4周)从组织学和功能学方面评估丝胶支架搭载mi R29-EVs处理过的原代成肌细胞治疗严重骨骼肌损伤模型的效果。结果:我们提取的原代成肌细胞的纯度达到了85%,在体外可以相互融合形成肌管,满足肌肉修复的需求。丝胶支架的孔隙率为93%,平均孔径为173μm。丝胶支架可以支持原代成肌细胞的粘附生长。丝胶支架移植到体内6周基本降解完毕,丝胶支架降解液在体外下调成纤维细胞纤维化相关蛋白Col1a1和Vimentin的水平。EVs作为核酸载体,具有优良生物相容性、高递送效率和保护mi R29免受降解的作用。体外实验证明,在有或无TGF-β1刺激下,mi R29-EVs都能促进成肌细胞分化形成肌管。mi R29-EVs可以上调成肌细胞的成肌分化基因Myo D...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1骨骼肌损伤后TGF-β1和miR-29含量变化

华中科技大学硕士学位论文1B）以及活化蛋白（图1C）的表达水平逐渐升高，并且都呈现出损伤后第5天达到高峰，然后逐渐下降的动态变化过程。文献报道，在成肌细胞中，miR-29表达上调，可以对抗TGF-β1的抑制成肌细胞分化形成肌管以及促进成肌细胞向肌....

图2原代成肌细胞的提取和鉴定

华中科技大学硕士学位论4.2原代成肌细胞的提取、鉴定我们从1-3日龄C57/BL6乳鼠中提取了原代成肌细胞[26]，通疫荧光染色对其进行鉴定，desmin是一种中间丝蛋白，仅在成肌细胞达[27]，结果显示，原代成肌细胞的提取纯度可达到85%（图....

图3丝胶支架的合成和表征

华中科技大学硕士学位论文4.3丝胶支架的合成和表征通过溴化锂裂解法从丝素蛋白缺陷型家蚕突变体（Bombyxmori，140Nd-s）产生的蚕茧中提取了丝胶蛋白[28]，与交联剂京尼平交联形成丝胶水凝胶，真空冻干后形成丝胶支架（图3A），移植到小鼠体内....

图5miR29-EVs的提取、鉴定

中提取miR29-EVs[31]。我们接着对miR29-EVs进行了以下鉴定。TEM结果显示miR29-EVs具有囊泡的双层膜结构（图5B）；通过DLS检测得到，miR29-EVs平均粒径为158nm，最高峰值为188nm（图5C）；WB结果显示miR....

本文编号：3956414