miR-329-3p对神经干细胞增殖和分化的影响及其机制研究

发布时间：2024-07-04 23:50

　　脊髓损伤为脊柱外科较为严重的疾病之一,多因物理损伤导致,患者伤后常出现损伤部位以远的肢体感觉、运动,甚至二便功能障碍。脊髓损伤可分为不完全性或完全性神经损伤,依据损伤的类型和轻重程度,神经功能恢复所需时间长短不一。因神经损伤后难以自行修复,所以损伤严重者往往终生残留肢体功能障碍。这不仅降低了患者自身的生活质量,而且护理和治疗相关费用也给患者家庭带来较大的经济压力。目前脊髓损伤的发病率在逐渐升高,关于脊髓损伤后的神经修复和再生已成为所有研究人员面临的严峻挑战。伴随现代生物技术的日新月异,人们逐渐认识到神经细胞可通过干细胞的移植而再生,使损伤的神经功能得到修复。神经干细胞是干细胞成员之一,具有增殖、自我更新和分化为多种神经组织细胞的特点。神经干细胞可分为内源性和外源性神经干细胞。内源性神经干细胞在成体中枢神经系统内数量较少,再生能力较低,依靠刺激内源性神经干细胞,不足以补偿损失的神经细胞与组织,目前通过神经干细胞移植来补偿神经细胞与组织的缺失已经成为脊髓损伤的治疗方法之一。但是,神经干细胞在不断受到学术界关注的同时,也面临着诸多问题。如干细胞移植治疗的安全性问题(致瘤性)以及干细胞移植后分...

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :基于基因芯片及实验验证选取目的microRNA
    1 前言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验细胞、主要试剂和仪器
            2.1.1 实验细胞
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 CCK-8 法绘制细胞生长曲线
            2.2.3 神经干细胞分化培养
            2.2.4 提取细胞RNA
            2.2.5 microRNA RT-qPCR检测
            2.2.6 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 神经干细胞的培养与分化
        3.2 神经干细胞的生长曲线
        3.3 大鼠神经干细胞与神经元中microRNA的差异表达
        3.4 miR-329 的茎环结构与miR-329-3p碱基序列
        3.5 miR-329-3p在神经干细胞分化过程中的表达变化
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :miR-329-3p调控NSCs增殖与分化的实验研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验细胞、主要试剂和仪器
            2.1.1 实验细胞
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 CCK-8 法绘制细胞生长曲线
            2.2.3 神经干细胞转染
            2.2.4 提取细胞RNA
            2.2.5 神经干细胞转染后相关基因RT-qPCR检测
            2.2.6 CCK-8 法检测细胞增殖
            2.2.7 EdU法检测细胞增殖
            2.2.8 荧光素酶实验
            2.2.9 Western blot检测相关蛋白表达
            2.2.10 免疫荧光检测
            2.2.11 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 检测miR-329-3p mimic于神经干细胞内的转染情况
            3.1.1 转染效率检测
            3.1.2 RT-qPCR法检测神经干细胞转染miR-329-3p mimic后 miR-329-3p表达情况
        3.2 miR-329-3p调节神经干细胞增殖的功能研究
            3.2.1 miR-329-3p过表达抑制了神经干细胞的增殖
            3.2.2 通过生物信息学预测E2F1是miR-329-3p的一个作用靶点
            3.2.3 荧光素酶实验检测miR-329-3p靶向调控E2F
            3.2.4 miR-329-3p在神经干细胞内靶向调控E2F1 的表达
            3.2.5 干扰E2F1 抑制神经干细胞增殖
        3.3 miR-329-3p调节神经干细胞分化的功能研究
            3.3.1 miR-329-3p过表达促进了神经干细胞向神经元的分化
            3.3.2 E2F1 在神经干细胞分化过程中的表达变化
            3.3.3 miR-329-3p靶向E2F1 调控神经干细胞的分化
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4000714