hAMSCs对小鼠创面HA及胶原表达的影响研究

发布时间：2017-05-28 04:03

  本文关键词：hAMSCs对小鼠创面HA及胶原表达的影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:初步探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)小鼠创面局部移植对ECM中HA及胶原表达的影响,完善h AMSCs促进创面愈合的机制研究,为进一步将h AMSCs转化到临床应用提供基础研究。方法:提取h AMSCs,取其生长良好的第3-5代细胞,采用流式细胞仪分析细胞表面分子标记及成脂和成骨细胞诱导分化鉴定h AMSCs。以96只C57BL/6小鼠为实验动物,分为正常组(正常小鼠)、对照组(DMEM培养基)及实验组(h AMSCs移植)三组,每组32只动物,对照组小鼠背部脊柱两侧建立全层皮肤缺损模型(每只2处,共64处),采用DMEM培养基100u L于64处创面周围皮下环形注射,实验组小鼠背部脊柱两侧建立全层皮肤缺损模型后同法创面周围皮下环形注射h AMSCs(1×106个/m L)100u L,正常组小鼠不制作皮肤创面作为正常对照。在建模后1天、3天、7天、14天分别切取各组创面模型皮肤标本。记录对照组及实验组创面愈合过程的大体外观,并通过细胞示踪实验观察h AMSCs移植后存活状态,Masson染色观察胶原积累情况,免疫组织化学染色后观察创面皮肤组织高分子量HA阳性表达情况,q PCR技术测定创面皮肤组织中高分子量HA、I、III的基因表达情况。结果:人羊膜间充质干细胞生长曲线显示细胞生长曲线呈“S”形,FCM结果显示:第4代h AMSCs均高表达CD90、CD105、CD73,其阳性率分别96.6%、95.1%、98.1%,低表达或不表达CD34、CD11b、CD19、CD45、HLA-DR,其阴性率为0.3%,细胞成脂诱导培养21d时行油红O染色,可见脂滴处呈红色;成骨诱导培养21d行茜素红S染色,可见红色钙化结节。实验组小鼠背部创面3、7、14d三个时间点愈合率分别是33.93±2.71、75.17±3.69、98.1±1.66明显优于对照组27.29±3.41、62.37±5.24、95.46±2.56(P0.05),并且瘢痕愈合较其他组都小而柔软;通过细胞示踪证明局部移植的h AMSCs在建模14d后依旧存活。免疫组织化学染色检测实验组高分子量HA表达量,高分子量HA分别在1、3、7、14d表达为40.321±2.348、49.463±1.976、45.463±2.498、40.463±2.341,其表达量呈先递增后降低趋势,至3d达到最大表达量,随之呈降低变化,对照组中高分子量HA分别在1、3、7、14d表达为37.463±2.243、43.463±2.082、36.463±1.932、30.463±2.987,其表达量与实验组变化规律相同,正常组的高分子量HA表达量均在27.463±2.671范围内,每一个时间点均小于实验组及对照组,而且实验组每一个时间点均大于对照组(P0.05),差异均有统计学意义。q PCR结果显示:实验组高分子量HAm RNA表达在1、3、7、14d分别为0.587±0.046、0.854±0.176、0.679±0.033、0.524±0.066,对照组0.277±0.033、0.376±0.034、0.261±0.046、0.234±0.024,正常组为0.176±0.076,实验组III型胶原m RNA表达在1、3、7、14d分别为0.215±0.014、0.218±0.026、0.225±0.006、0.216±0.048,对照组0.173±0.009、0.201±0.0035、0.198±0.013、0.199±0.014,正常组为0.151±0.012,实验组I型胶原m RNA表达在1、3、7、14d分别为0.251±0.028、0.316±0.045、0.322±0.011、0.298±0.021,对照组0.505±0.007、0.547±0.079、0.682±0.195、0.719±0.133,正常组为0.146±0.003,其表达规律及形式均与免疫组化结果相对应(P0.05),并且I/III型胶原比值在1、3、7、14d实验组为1.171±0.046、1.469±0.176、1.434±0.033、1.430±0.066,对照组为2.926±0.333、2.800±0.034、3.481±0.046、3.602±0.024,正常组为0.971±0.076,对照组的比值大于实验组和正常组,实验组大于正常组(P0.05),差异均有统计学意义,Masson染色切片胶原染呈蓝色,正常组为正常皮肤组织,胶原排列呈网状,胶原间间隙较大;1d、3d实验组较对照组胶原排列紧密,胶原相对变粗,胶原间隙相对变小,染色较深;对照组胶原纤细,排列紊乱,胶原间隙增大,染色较淡;7d、14d实验组较对照组胶原排列呈网状结构,胶原间间隙增大,胶原相对变细,对照组胶原纤维排列紊乱,呈旋涡状,胶原明显粗大,胶原间隙排列紧密。结论:1.h AMSCs可以调控细胞外基质成分,上调高分子量HA、III型胶原蛋白,下调I型胶原蛋白,降低I/III型胶原蛋白比例。2.h AMSCs局部注射对小鼠背部皮肤缺损具有促进愈合的生物学效应。
【关键词】：hAMSCs 细胞外基质 胶原蛋白 透明质酸 创面愈合
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R641
【目录】：

• 中英缩略词对照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-20
• 结果20-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-38
• 综述38-46
• 参考文献42-46
• 致谢46-47
• 作者简介47

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本文编号：401823