N6调节内质网应激促进大鼠脊髓损伤修复的研究

发布时间：2017-05-28 18:12

  本文关键词：N6调节内质网应激促进大鼠脊髓损伤修复的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】:脊髓损伤是发生于中枢神经系统的严重损伤,可导致难以恢复的神经功能障碍,以损伤平面以下的运动、感觉、反射功能的减弱或消失为主要表现,会造成患者残疾甚至死亡,给患者家庭及社会带来沉重的经济负担。内质网应激被发现与众多神经系统疾病相关,并被证实在脊髓损伤的病理进程中发挥重要作用。GRP78和CHOP是内质网应激过程中的关键蛋白分子。N6是我科自主研发的用于治疗脊髓损伤的鸡尾酒神经保护剂,其主要成分为地塞米松、神经节苷脂GM1、神经营养因子等。前期研究显示N6能够降低大鼠脊髓损伤处的脂质过氧化水平并抑制神经细胞凋亡。本研究通过建立Sprague-Dawley大鼠脊髓打压损伤模型,观察打压损伤后脊髓组织中内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达量,大鼠后肢运动功能和脊髓髓鞘的存留情况,探讨N6对损伤脊髓的保护作用及相关机制,为今后改进配方和临床应用提供理论基础和参考依据。【方法】:60只雌性SD大鼠被随机分为5组(n=12):假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)、甲强龙30mg/kg腹腔给药组(MP-a组)、甲强龙20μL蛛网膜下腔给药组(MP-b)和N6鸡尾酒神经保护剂20μL蛛网膜下腔给药组(Cocktail组)。利用NYU打击器建立大鼠急性脊髓损伤模型。给药组造模成功10min后即给予相应药物治疗,非给药组不做治疗处理。各组大鼠于治疗后72h,提取损伤段脊髓蛋白,用Western-Blot方法检测GRP78和CHOP相对表达量;多聚甲醛灌注后取损伤段脊髓组织制作切片行CHOP免疫荧光染色并进行观察;大鼠每7天进行后肢运动功能BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)评分,28d时处死并取损伤段脊髓组织制作切片,行LFB(Luxol Fast Blue)染色后观察髓鞘存留面积变化情况。【结果】:与SCI组、MP-a和MP-b组相比,Cocktail组大鼠的脊髓组织中GRP78表达水平较高(P0.05)、CHOP表达水平较低(P0.05),后肢BBB评分在第14、21、28d较高(P0.05),髓鞘存留面积比例更大(P0.05)。MP-a与MP-b组的GRP78和CHOP表达量无明显差异(P0.05),第28天的髓鞘存留面积比例无明显差异(P0.05),第28d时与SCI组的后肢BBB评分差异不明显(P0.05)。【结论】:与传统的甲强龙冲击疗法相比,蛛网膜下腔注射鸡尾酒神经保护剂N6,能够更好的调节脊髓损伤大鼠损伤部位的ERS水平,提高UPR相关蛋白GRP78表达量,减少ERS诱导凋亡关键分子CHOP的表达量,保护脊髓白质,减少髓鞘破坏,有利于脊髓损伤大鼠运动功能的恢复。在脊髓损伤的临床治疗中可以进一步进行探索和推广。
【关键词】：脊髓损伤 内质网应激 GRP78 CHOP 鸡尾酒神经保护剂 N6
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-9
• 一、前言9-11
• 二、材料11-13
• （一）仪器设备11-12
• （二）主要试剂12
• （三）实验动物12-13
• 三、方法13-17
• （一）实验动物分组13
• （二）脊髓损伤模型制备和给药13-14
• （三）免疫印迹14-15
• （四）免疫荧光15-16
• （五）运动功能评价16
• （六）髓鞘染色16-17
• （七）数据统计17
• 四、结果17-21
• （一）免疫印迹17-18
• （二）免疫荧光18-19
• （三）运动功能19-20
• （四）髓鞘染色20-21
• 五、讨论21-27
• 六、结论27-28
• 参考文献28-31
• 附录31-32
• 综述 脊髓损伤治疗药物的研究现状32-44
• 参考文献38-44
• 发表论文和参加科研工作情况44-45
• 致谢45

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本文编号：403202