BMSCs在小鼠同种异体皮肤移植抗排斥中的作用及机制研究

发布时间：2017-06-06 10:18

  本文关键词：BMSCs在小鼠同种异体皮肤移植抗排斥中的作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal stem cells,BMSCs)对小鼠同种异体皮肤移植的免疫调节作用及其可能机制。方法:将30只雄性C57BC/6小鼠受体随机分为3组,分别为同系移植组、对照组、实验组,每组10只。同系移植组受体在移植同系皮肤术后2小时自尾静脉注射PBS 350μL,对照组受体在同种异体皮肤移植术后2小时自尾静脉注射PBS 350μL,实验组受体在同种异体皮肤移植术后2小时自尾静脉注射2×104/g BMSCs。检测项目包括:(1)移植皮肤存活时间;(2)移植物病理学检查;(3)Real-Time PCR检测受体脾脏FOXP3 m RNA相对表达量;(4)ELISA检测受体血清中的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4。结果:同系移植组移植皮肤存活均超过20天。相对于对照组,实验组小鼠移植皮肤的存活时间延长,差异有统计学意义(P0.05)。移植物HE染色显示:实验组炎性细胞的浸润数量明显少于对照组。实验组脾脏FOXP3 m RNA表达量明显高于对照组(P0.05)。与对照组比较,实验组血清中的IL-2、INF-γ和TNF-α含量降低,差异有统计学意义(P0.05),IL-4含量升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1、成功分离并鉴定出BMSCs;2、成功建立小鼠皮肤移植模型;3、BMSCs能够延长同种异体移植皮肤的存活时间,其机制可能是通过调节脾脏FOXP3 m RNA的表达和相关细胞因子分泌来实现的。
【关键词】：排斥反应 间充质干细胞 皮肤移植
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R622
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定11-18
• 2.1 实验材料11-13
• 2.1.1 实验动物11
• 2.1.2 主要试剂及耗材11-12
• 2.1.3 主要仪器12
• 2.1.4 主要试剂和溶液的配制12-13
• 2.2 实验方法13-15
• 2.2.1 BMSCs采集13-14
• 2.2.2 BMSCs换液和传代培养14
• 2.2.3 流式细胞仪鉴定BMSCs14
• 2.2.4 BMSCs分化14-15
• 2.3 实验结果15-16
• 2.3.1 BMSCs表面标记鉴定15-16
• 2.3.2 BMSCs多向分化的功能鉴定16
• 2.4 讨论16-17
• 2.5 结论17-18
• 第3章 小鼠皮肤移植模型的建立18-22
• 3.1 实验材料18-19
• 3.1.1 实验动物18
• 3.1.2 主要试剂及耗材18
• 3.1.3 主要仪器18-19
• 3.2 实验方法19-20
• 3.2.1 小鼠皮肤移植模型建立19-20
• 3.3 术后处理与观察20
• 3.4 结果20
• 3.5 讨论20-21
• 3.6 结论21-22
• 第4章 BMSCs在小鼠同种异体皮肤移植抗排斥中的作用及机制研究22-39
• 4.1 实验材料22-25
• 4.1.1 实验动物22
• 4.1.2 主要试剂及耗材22-23
• 4.1.3 主要仪器23
• 4.1.4 主要试剂和溶液的配制23-24
• 4.1.5 PBS缓冲液配制24-25
• 4.2 实验方法25-33
• 4.2.1 小鼠皮肤移植动物模型的建立25
• 4.2.2 小鼠BMSCs的制备25
• 4.2.3 实验分组25
• 4.2.4 移植效果评价25
• 4.2.5 实验取材25-26
• 4.2.6 HE染色26
• 4.2.7 ELISA法检测小鼠血清IL-2 表达含量26-27
• 4.2.8 ELISA法检测小鼠血清IFN-γ 表达含量27-28
• 4.2.9 ELISA法检测小鼠血清TNF-α 表达含量28-29
• 4.2.10 ELISA法检测小鼠血清IL-4 表达含量29-30
• 4.2.11 脾脏组织RNA提取30-31
• 4.2.12 逆转录实验31-32
• 4.2.13 Real-Time PCR实验32-33
• 4.3 统计学分析33
• 4.4 实验结果33-36
• 4.4.1 移植皮肤存活情况33
• 4.4.2 HE染色法观察移植部位皮肤情况33-35
• 4.4.3 Real-Time PCR检测受体脾脏FOXP3 m RNA相对表达量35
• 4.4.4 ELISA法检测受体血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α 和IL-435-36
• 4.5 讨论36-37
• 4.6 全文总结37-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-49
• 参考文献47-49

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