YAP在大鼠不同节段髓核细胞中的表达初探

发布时间：2017-06-27 17:14

  本文关键词：YAP在大鼠不同节段髓核细胞中的表达初探，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨大鼠不同节段髓核细胞中YAP的表达情况；观察不同细胞密度下YAP信号通路激活情况；在体外模拟椎间盘血清剥夺的微环境下YAP的表达情况。方法：1、体外连续传代、培养SD大鼠正常的腰椎髓核细胞、尾椎髓核细胞；观察P0代腰椎髓核.细胞中不同形态髓核细胞的增殖情况；2、分别培养至P3代,观察各髓核细胞的形态学变化；3、免疫荧光法观察P3代腰椎髓核细胞中YAP的表达；4、各髓核细胞在P3代时,同时对50%融合状态下腰椎髓核细胞(A组),90%融合状态下腰椎髓核细胞(B组),50%融合状态下尾椎髓核细胞(C组),90%融合状态下尾椎髓核细胞(D组),共四组细胞行RT-PCR检测细胞中YAP的表达差异；5、同时对步骤4中50%及90%融合状态下的腰椎髓核细胞与尾椎髓核细胞的细胞核、细胞质行Western-blot检测,依次命名An、Ac、Bn、Bc、Cn、Cc、Dn、Dc,对比YAP表达差异；6、尾椎髓核细胞正常传代至P3代后,予以营养剥夺,用不含血清的培养液培养,10天后对含血清的髓核细胞与不含血清的髓核细胞行Western-blot检测YAP蛋白表达情况,进行对比。结果：1、不同髓核细胞在培养过程中培养周期不同,提示增殖情况不一,其中腰椎髓核细胞培养周期较尾椎髓核细胞增殖周期长；P0代髓核细胞中存在不同形态的细胞,腰椎以短梭形或多角形为主,尾椎以圆形或椭圆形为主；随着传代次数的增多,部分髓核细胞向长梭形转变；P0代尾椎髓核细胞中存在内含大空泡的脊索样髓核细胞；2、P3代腰椎髓核细胞在低密度接触时,免疫荧光法检测提示细胞核中高表达YAP蛋白；高密度接触时,提示细胞浆高表达YAP蛋白；3、RT-PCR检测50%及90%融合状态下的腰椎髓核细胞和尾椎髓核细胞中YAP的表达,实验结果显示,B组YAP表达较A组减少,差异有统计学意义(P0.05)；C组YAP表达较A组稍增多,差异无统计学意义(P0.05)；B组YAP表达较D组稍减少,无统计学差异：C组YAP表达较D组增多,差异有统计学意义(P0.05)。4、Western-blot检测提示腰椎髓核细胞与尾椎髓核细胞在50%融合状态下的核内YAP表达较90%融合状态下表达高,胞质表达低,其差异均有统计学意义。5、营养剥夺组尾椎髓核细胞总YAP表达较正常组表达减少。结论：1、髓核细胞中存在YAP蛋白的表达；2、尾椎髓核细胞较腰椎髓核细胞生长更加迅速,但其YAP表达无差异；3、细胞接触与营养剥夺引起髓核细胞YAP信号的抑制或核质分布表达差异。
【关键词】：尾椎 腰椎 髓核细胞 细胞增殖 YAP
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R681.5
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩略语名词对照表10-13
• 前言13-15
• 第一章：文献综述15-21
• 第二章：材料与方法21-33
• 第三章：实验结果33-38
• 第四章：讨论38-42
• 第五章：结论42-43
• 参考文献43-49
• 致谢49-50
• 作者简介50

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