盐酸戊乙奎醚对脂多糖介导的A549细胞损伤及功能性蛋白SP-A、SP-D表达的影响

发布时间：2017-08-02 22:10

  本文关键词：盐酸戊乙奎醚对脂多糖介导的A549细胞损伤及功能性蛋白SP-A、SP-D表达的影响

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【摘要】：目的观察抗胆碱药物盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)所介导的A549细胞损伤及表面活性蛋白SP-A、SP-D表达的变化,并探讨其作用机制。方法采用A549细胞作为研究对象,实验共分为三组：①空白对照组(C组)：A549细胞+DMEM培养液；多糖组(L组)：A549细胞+DMEM培养液+10mg/L脂多糖；。脂多糖+戊乙奎醚组(L+P组)： A549细胞+DMEM培养液+10mg/L脂多糖+5mg/L戊乙奎醚。培养一定时间后分别进行以下检测和观察(1)噻唑蓝(MTT)法药物敏感试验分别检测6h,12h,24h和36h各组A549细胞的OD值;(2)检测各组培养液中损伤因子乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、丙二醛(MDA)的表达情况；(3)用高倍显微镜观测各组细胞形态学改变；(4)利用流式细胞仪检测各组中A549细胞的周期及凋亡情况；(5)使用Rt-PCR技术检测各组中表面活性蛋白SP-A、SP-D的mRNA表达情况。(6)分别使用Western-blot和ELISA的方法检测各组中A549细胞裂解液中表面活性蛋白SP-A、SP-D的表达情况；结果(1)MTT检测结果：与C组比较,L组和L+P组的OD值明显降低；L+P组与L组比较,L+P组的OD值除6h外均明显升高。(2)损伤因子检测结果：L+P组乳酸脱氢酶及丙二醛的表达较L组明显降低。(3)细胞形态学改变：L组A549细胞与C组比较, 体积扁小,外观偏圆, 胞质呈空亮, 在胞质内出现了大小不等的颗粒；加入PHC干预后的L+P组A549细胞表现有所改善。(4)细胞的周期及凋亡情况：与C组比较,L组细胞的增殖活性明显降低,细胞的凋亡率也明显增加,S期细胞比率下降,G0/G1期细胞的比率升高；与L组比较,L+P组细胞存活率升高,细胞凋亡率下降,G0/G1期细胞比率降低,G2/M期细胞比率均增加。(5)Rt-PCR结果：与L组比较,L+P组表面活性蛋白SP-A、SP-D的mRNA表达显著增强。(6)Western-blot与ELISA结果：与L组比较,L+P组SP-A、SP-D的表达显著增强,细胞裂解液中蛋白的含量明显增高。结论抗胆碱药物PHC能够抑制LPS对A549细胞的损伤,并使表面活性蛋SP-A、SP-D的表达增强,SP-A,SP-D可能参与了PHC对A549细胞损伤的保护。
【关键词】：戊乙奎醚 脂多糖 A549 SP-A SP-D
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 个人简历3-5
• 英文缩略词5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-26
• 统计学处理26-27
• 结果27-34
• 讨论34-39
• 结论39-40
• 参考文献40-45
• 综述45-50
• 综述参考文献48-50
• 致谢50-51
• 攻读学位期间发表的学术论文51

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本文编号：611438