川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤后GFAP表达的影响

发布时间：2017-08-03 21:06

  本文关键词：川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤后GFAP表达的影响

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【摘要】：目的:观察大鼠急性脊髓损伤后GFAP(胶质纤维酸性蛋白,glial fibrillary acidic protein)在受损脊髓的不同时间点的表达变化,分析GFAP在脊髓内源性神经干细胞的增殖和分化过程中的作用机制,明确川芎嗪治疗脊髓损伤的分子机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组(A组36只)、假手术组(B组36只)、模型组(C组36只),川芎嗪干预组(D组36只)。用改良Allen's法建立大鼠急性脊髓损伤模型。D组在伤后每日2%盐酸川芎嗪注射液腹腔注射,200 mg/kg(首次给药在术后30 min),A、B、C三组在同一时间给予等量生理盐水。共10天。于造模后第8小时、1天、3天、7天、14天、28天进行斜板实验、BBB评分神经功能行为学评价。于造模后第8小时、1天、3天、7天、14天、28天每组分别处死6只大鼠,以脊髓受损处为中心上下长各约5mm取大鼠的脊髓进行HE染色、尼氏染色、免疫组化检测。用HE染色和尼氏染色观察脊髓的病理形态学变化,用免疫组化法检测代表脊髓内源性神经干细胞的Brdu+细胞和Nestin+细胞的表达,及GFAP在大鼠脊髓表达变化情况。对检测结果进行统计分析,并对Brdu+和Nestin+细胞、GFAP在脊髓中的表达进行相关性分析。结果:1、大鼠造模损伤脊髓后,C组、D组大鼠的后肢运动功能显著降低,脊髓功能严重损伤,大鼠在斜板上维持的最大角度与BBB评分均明显降低,与A组比较有显著性差异(P0.01);D组大鼠治疗后在斜板上维持的最大角度呈明显上升趋势,在第14天、28天与模型对照组对比有显著差异(P0.05)。D组大鼠在治疗后BBB评分逐渐增加,在第3天、14天、28天与C组比较有显著差异(P0.01);2、通过大鼠脊髓组织切片进行HE染色和尼氏染色观察各组大鼠脊髓组织的病理学变化。脊髓损伤后可见受损脊髓水肿,局灶性出血,神经元胞体皱缩、核固缩,尼氏小体开始n少和消失,神经元变性,第3天后出现脊髓水肿加重,局灶性出血范围增大,炎性细胞浸润明显,灰质部分组织溶解形成空泡;至第7天、14天坏死范围进一步扩大,炎症水肿逐渐减轻,至第28天,坏死区周围瘢痕增生,向坏死区填充。川芎嗪能明显减轻脊髓损伤后水肿、炎性细胞浸润及出血程度,保护神经细胞,促进脊髓组织修复;3、脊髓损伤后,Brdu+细胞被激活,在脊髓中的表达明显增多,在脊髓白质、灰质及中央管室管膜区均有表达。在第7天达到峰值,随后逐渐减少。川芎嗪能明显促进Brdu+细胞增殖,在损伤后第7天、14天、28天,与C组比较有显著差异(P0.01)。川芎嗪能显著促进Nestin+细胞表达,在第7天达到峰值,在损伤后第7天、14天、28天与C组比较有显著性差异(P0.01);川芎嗪能显著促进GFAP+细胞表达,在第7天达到峰值,在损伤后第7天、14天、28天与C组比较有显著性差异(P0.01)。4、经对GFAP表达、Nestin+细胞和Brdu+细胞在脊髓中的表达数进行相关性分析,GFAP表达与Nestin+细胞表达呈正相关关系。结论:1、GFAP的表达与脊髓内源性干细胞的增殖分化呈正相关趋势;2、川芎嗪能够对脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖分化有促进作用;3、川芎嗪能够促进脊髓损伤后GFAP的表达。
【关键词】：胶质纤维酸性蛋白 急性脊髓损伤 内源性神经干细胞 川芎嗪
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-11
• 前言11-15
• 第一部分 材料与方法15-23
• 1 实验材料15-16
• 1.1 主要材料和试剂15
• 1.2 主要仪器和设备15-16
• 2 实验方法16-21
• 2.1 动物分组及模型建立16
• 2.1.1 动物分组16
• 2.1.2 大鼠急性脊髓损伤模型的建立16
• 2.2 药物干预16-17
• 2.3 术后护理17
• 2.4 神经功能及行为学观察17-19
• 2.4.1 Basso Beattie Bresnahan (BBB)运动功能评分17-19
• 2.4.2 Ravlin斜板实验19
• 2.5 取材19
• 2.6 HE染色观察19-20
• 2.7 尼氏染色观察20
• 2.8 免疫组织化学法检测Brdu+、nestin+、GFAP细胞的表达20-21
• 3 统计学分析21-23
• 第二部分 实验结果23-37
• 1 神经功能及行为学评价23-28
• 1.1 BBB评分23-25
• 1.2 改良Rivlin斜板实验25-28
• 2 HE染色结果28
• 3 尼氏染色结果28-29
• 4 免疫组织化学法检测BrdU+、Nestin+和GFAP阳性细胞结果29-37
• 4.1 Brdu阳性细胞检测结果29-31
• 4.2 Nestin阳性细胞检测结果31-33
• 4.3 GFAP阳性细胞检测结果33-37
• 第三部分 讨论37-63
• 1 急性脊枿损伤病因病机的中医角度的认识37-38
• 2 改良Allen’s急性脊髓损伤模型的评估38-40
• 3 星形胶质细胞细胞骨架及生物学功能40-41
• 4 急性脊髓损伤后内源性脊髓神经干细胞增殖分化41-45
• 5 脊髓微环境对内源性脊髓神经干细胞增殖与分化的影响45-48
• 5.1 促进脊髓损伤修复过程中内源性脊髓神经干细胞增殖分化的微环境3545-47
• 5.2 抑制脊髓损伤修复过程中内源性脊髓神经干细胞增殖分化的微环境47-48
• 6 川芎嗪对急性脊髓损伤的修复过程中的影响48-55
• 6.1 中药成分川芎嗪对急性脊髓损伤后的脊髓神经功能及行为学方面的影响48-50
• 6.2 中药成分川芎嗪对脊髓急性损伤后组织病理改变方面的影响50-51
• 6.3 中药成分川芎嗪干预在急性脊髓损伤治疗方面的机理51-55
• 7 纤维酸性星形胶质细胞标志物GFAP与神经干细胞55-63
• 7.1 GFAP在正常活体内的分布55-57
• 7.2 星形胶质细胞与神经干细胞57-59
• 7.3 GFAP在损伤脊髓组织中的表达变化59-61
• 7.4 GFAP表达与脊髓内源性神经干细胞增殖分化的相关性分析61-63
• 第四部分 结论63
• 第五部分 创新点63-64
• 参考文献64-75
• 附图75-93
• 缩略词表93-94
• 综述94-105
• 参考文献99-105
• 致谢105-106
• 研究生在校期间发表的论文及科研情况106

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本文编号：616301