miR-329调控E2F1对人骨肉瘤U-2OS细胞增殖及分化的影响

发布时间：2017-08-08 00:20

  本文关键词：miR-329调控E2F1对人骨肉瘤U-2OS细胞增殖及分化的影响

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【摘要】：背景和目的骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是一种原发性恶性骨肿瘤;在儿童和青少年高发,以男性多见。该病恶性程度较高,容易发生远处转移并且预后极差,有较高的致残率。近年来,随着治疗方法的大幅度进展,新的辅助放化疗联合外科手术等保肢治疗方法已经逐步取代了传统的截肢手术。然而,现代的治疗方法虽然从部分程度上提高了患者的生存率,但是术后5年的生存率仍然不尽人意。对转移和复发的患者来说,情况更不乐观。由于化疗药物耐药性的存在和外科手术存在一定的局限性,而骨肉瘤的确切发病机制尚未十分清楚,所以从根本上对骨肉瘤进行治疗仍然是一个难题。因此,新的诊断和预后生物标志物的识别以提高骨肉瘤患者的早期诊断,改善预后是相当重要的。miRNA是一类小的非编码RNA分子,能够结合靶基因的3’非翻译区域(UTR)从而发挥其调控作用。miRNA在多种生物过程中发挥作用,包括细胞分化、代谢和凋亡。近年来研究发现,miRNA参与肿瘤的发生和发展。miRNA已被证明在多种肿瘤中表达失调,包括卵巢癌、结肠癌、乳腺癌和食管癌等。miRNA可以作用于多种靶基因,根据靶基因的不同,其可以发挥癌基因或抑癌基因的作用。转录因子E2F1在细胞周期中发挥重要的调控作用。近年来,许多研究表明,E2F1在肿瘤的发生和发展中也参与调节并在多种癌症中表达失调,且在骨肉瘤中表达显示为阳性。E2F1能够参与调节全反式维甲酸诱导的骨肉瘤分化,而miRNA对E2F1又有一定的调控作用。综上所述,本实验选择miR-329作为研究基因,将miR-329转入骨肉瘤细胞U-2OS,探讨其在骨肉瘤中发生发展中的作用,为骨肉瘤的基因治疗提供理论依据、为进一步的研究提供实验基础。方法:骨肉瘤细胞U-2OS培养后,实验分3组:miR-329组,细胞转染miR-329;阴性对照组(negative control,NC):细胞转染无关序列;空白组(Blank):细胞仅加入转染试剂脂质体。1.采用q RT-PCR检测人成骨细胞h FOB1.19和骨肉瘤细胞U-2OS中miR-329和E2F1的表达水平。2.CCK-8法检测miR-329对骨肉瘤细胞U-2OS增殖的影响。3.细胞转染第14天,磷酸苯二钠法检测三组细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测三组细胞内I型胶原蛋白的含量。4.Western blot检测三组细胞内E2F1、OPN、Runx2和RARα蛋白表达水平。结果:1.骨肉瘤细胞中,miR-329的表达水平低于成骨细胞(P0.05);E2F1的表达水平高于成骨细胞(P0.05)。2.细胞转染后,miR-329组骨肉瘤细胞的增殖水平低于空白组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P0.05);而空白组与阴性对照组之间的细胞增殖能力相接近,差异无统计学意义(P0.05)。3.在细胞转染的第14天,miR-329组碱性磷酸酶的活性和I型胶原蛋白的含量高于空白组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05);空白组碱性磷酸酶的活性和I型胶原蛋白的含量与阴性对照组相接近,差异无统计学意义(P0.05)。4.E2F1的蛋白表达量在miR-329组低于空白组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05);空白组与阴性对照组E2F1的蛋白表达量相接近,差异无统计学意义(P0.05)。miR-329组OPN、Runx2和RARα的蛋白表达量高于空白组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05);而空白组OPN、Runx2和RARα的蛋白表达量与阴性对照组相接近,差异无统计学意义(P0.05)。结论:1.miR-329能够通过作用于E2F1抑制骨肉瘤细胞的增殖能力,并且诱导骨肉瘤细胞的成骨分化能力。2.本实验为骨肉瘤的基因治疗提供理论依据,为进一步研究提供实验基础。
【关键词】：miR-329 E2F1 骨肉瘤 增殖 分化
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 缩略词表11-12
• 引言12-14
• 材料和方法14-26
• 实验结果26-32
• 讨论32-36
• 小结36-37
• 参考文献37-41
• 综述 microRNA在骨肉瘤中的研究进展41-67
• 参考文献58-67
• 个人简历及在校期间发的论文67-68
• 致谢68

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本文编号：637441