α-亚麻酸预处理对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究

发布时间：2017-08-17 17:23

  本文关键词：α-亚麻酸预处理对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究

  更多相关文章： α-亚麻酸 急性肺损伤 炎症 氧化应激 凋亡 核转录因子κB

【摘要】：研究目的急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)已经成为危重病患者主要的致死原因之一。急性肺损伤可由多种因素触发产生,如休克、脓毒症、创伤、烧伤、重症肺炎和急性胰腺炎等。近期研究发现,n-3多不饱和脂肪酸对多个病种有益,如类风湿关节炎、哮喘、肠炎、动脉粥样硬化、神经退行性病变和心血管疾病。α-亚麻酸(ALA)是多不饱和脂肪酸(PUFAs)的重要成员之一,其表现出强效抗炎特征。目前,α-亚麻酸在急性肺损伤(ALI)中的作用尚不清楚。本研究旨在评估α-亚麻酸对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤的保护作用并探讨可能作用机制。研究方法1、气管内注射LPS(1mg/kg)建立急性肺损伤的动物模型。雄性C57BL/6小鼠,随机分为四组:假手术组(Sham):气管内注射生理盐水(1mg/kg);LPS组(LPS):气管内注射LPS(1mg/kg);α-亚麻酸低剂量组(ALA 360mg/kg):腹腔注射α-亚麻酸,1h后气管内注射LPS(1mg/kg);α-亚麻酸高剂量组(ALA 1800mg/kg):腹腔注射α-亚麻酸,1h后气管内注射LPS(1mg/kg)。2、各组均随机取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,收集支气管肺泡灌洗液并检测其中的蛋白浓度、细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10)水平以及炎症细胞(总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞)数;肺组织经灌洗后进行TUNEL染色。3、各组均随机取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,取小鼠肺组织,检测其干湿重比。4、各组均随机取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,选取右上肺叶进行HE染色,检测肺组织的损伤情况;其余肺组织检测髓过氧化物酶(MPO),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的表达水平。5、各组均随机取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,取小鼠肺组织,用蛋白印迹法检测caspase-3、IκBα和NF-κB(p65)的蛋白表达情况。6、体外培养RAW264.7细胞系,α-亚麻酸(10μM、100μM)预处理1小时后,LPS(1μg/ml)刺激6小时,取细胞上清检测巨噬细胞分泌细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10)的水平;取细胞提取蛋白后检测caspase-3、IκBα和NF-κB(p65)的蛋白表达情况。结果1、LPS组小鼠支气管肺泡灌洗液中的蛋白浓度,TNF-α、IL-6、IL-1β的水平显著高于Sham组(P值均小于0.01);α-亚麻酸预处理组小鼠支气管肺泡灌洗液中的蛋白浓度,TNF-α,IL-6、IL-1β水平显著低于LPS组(P值均小于0.05);LPS组小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-10水平与Sham组无统计学差异(P0.05),但α-亚麻酸高剂量组IL-10水平显著高于LPS组(P0.01);LPS组小鼠支气管肺泡灌洗液中的细胞总数和中性粒细胞数显著高于Sham组(P0.01),α-亚麻酸预处理组小鼠支气管肺泡灌洗液中的细胞总数和中性粒细胞数显著低于LPS组(P值均小于0.01);LPS组中巨噬细胞数显著低于Sham组(P0.01),而α-亚麻酸预处理可呈剂量依赖性的逆转此降低趋势(P值均小于0.05);α-亚麻酸组中肺组织TUNEL染色显示细胞凋亡显著少于LPS组,染色阳性细胞比例显著降低(P值均小于0.01)。2、α-亚麻酸组肺组织干湿重比显著低于LPS组(P值均小于0.01)。3、α-亚麻酸组中肺组织病理损伤程度显著轻于LPS组(P值均小于0.05);α-亚麻酸组肺组织中的MPO和MDA的水平显著低于LPS组(P值均小于0.05),同时SOD和GSH的活性明显高于LPS组(P值均小于0.05)。4、α-亚麻酸组肺组织的caspase-3、磷酸化的IκBα和NF-κB(p65)蛋白表达水平显著低于LPS组。5、LPS刺激RAW264.7细胞系6h后,LPS组细胞上清中TNF-α,IL-6、IL-1β水平显著高于Sham组(P值均小于0.05),IL-10水平无统计学差异(P0.05);而α-亚麻酸预处理组细胞上清中的TNF-α,IL-6、IL-1β水平显著低于LPS组(P值均小于0.05),且IL-10水平也无统计学差异(P0.05)。另外,LPS刺激RAW264.7细胞系6h后,caspase-3、磷酸化的IκBα和NF-κB(p65)蛋白表达水平显著低于LPS组。结论α-亚麻酸可以有效的保护LPS导致的急性肺损伤,NF-κB通路可能在α-亚麻酸介导的这种保护性作用中起关键作用。
【关键词】：α-亚麻酸 急性肺损伤 炎症 氧化应激 凋亡 核转录因子κB
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-11
• 前言11-12
• 第一部分 α-亚麻酸在LPS诱导的小鼠急性肺损伤中的保护作用12-33
• 一、材料和方法12-21
• 二、实验结果21-31
• 三、讨论31-33
• 第二部分 α-亚麻酸对单核巨噬细胞分泌细胞因子的影响33-43
• 一、材料和方法33-37
• 二、实验结果37-41
• 三、讨论41-43
• 全文总结43-44
• 参考文献44-48
• 综述 n-3多不饱和脂肪酸在不同临床疾病中的研究进展48-55
• 参考文献52-55
• 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明55-56
• 致谢56-57

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