Sox-9基因修饰BMSCs复合骨支架材料构建组织工程椎间盘的实验研究

发布时间：2017-09-04 23:43

  本文关键词：Sox-9基因修饰BMSCs复合骨支架材料构建组织工程椎间盘的实验研究

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【摘要】：目的:本研究利用异种骨制备的脱细胞脱钙骨组织工程复合多孔支架,将传代培养的Sox-9基因修饰后SD大鼠骨髓间充质干细胞种植于其中,并在Balb/c裸鼠皮下进行移植,检测细胞支架复合物的理化性能和生物相容性,探讨其成为组织工程椎间盘的可行性,为椎间盘组织工程的研究提供实验依据。方法:(1)复苏Sox-9基因修饰的SD大鼠骨髓间充质干细胞,采用常规办法对其进行传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态。同时将已经制作成型的骨支架消毒,放入无菌的24孔板中,将已经进行过脱壁处理的基因修饰骨髓间充质干细胞接种于支架上,体外培养48小时,倒置显微镜、扫描电镜、组织学染色观察细胞在支架上的粘附情况。(2)细胞支架复合物体外培养2天后,分实验侧和对照侧将其植入Balb/c裸鼠背部皮下。体内培养2月后,肉眼观察裸鼠背部植入部位情况;处死裸鼠,取出细胞支架复合物,行冰冻切片,扫描电镜、组织学染色观察细胞在支架上的生长情况,行II型胶原免疫组化染色,qRT-PCR技术检测支架中骨髓间充质干细胞的Sox-9基因、II型胶原表达水平。结果:(1)镜下Sox-9基因修饰SD大鼠骨髓间充质干细胞呈长梭形,在第3代开始出现衰老的形态表现;细胞接种支架后,倒置相差显微镜下、扫描电镜、HE染色观察骨髓间充质干细胞在支架上粘附良好。(2)细胞支架复合物体内培养2月后,肉眼观察在裸鼠皮下植入部位周围无感染及炎症反应,细胞支架复合物呈楔形,与皮肤内面愈合,II型胶原免疫组化染色阳性,qRT-PCR检测实验侧支架复合物中骨髓间充质干细胞的Sox-9基因、II型胶原表达水平比对照侧高。P0.01,△P0.05,有统计学意义。结论:(1)使用静态接种技术构建骨支架材料与基因转染BMSCs的复合体,可以实现细胞黏附于骨支架并在骨支架内增殖;(2)体外构建的细胞支架复合物在裸鼠皮下培养的方法得到的产物,经检测证实细胞仍能够稳定表达Sox-9目的基因和II型胶原,支架材料仍大部分存在,产物较体外培养更接近类软骨组织。
【关键词】：基因修饰间充质干细胞 Sox-9基因 骨支架 椎间盘组织工程
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R318.08;R687
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-12
• 第一部分 基因修饰BMSCs传代培养与接种骨支架后的生物相容性评估12-17
• 1 实验材料12-13
• 2 实验方法13-14
• 3.实验结果14-17
• 第二部分 细胞支架复合物种植裸鼠皮下体内培养的实验研究17-24
• 1 实验材料17-18
• 2 实验方法18-20
• 3.实验结果20-24
• 讨论24-27
• 结论27-28
• 参考文献28-32
• 文献综述32-40
• 参考文献36-40
• 附录1 主要中英文对照表40-41
• 附录2 发表论文和参加科研情况41-42
• 致谢42

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