印记基因（H19、Grb10）和miR-675对骨损伤愈合骨细胞增殖与分化的影响

发布时间：2017-09-10 22:01

  本文关键词：印记基因（H19、Grb10）和miR-675对骨损伤愈合骨细胞增殖与分化的影响

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【摘要】：研究目的:印记基因对于细胞代谢调节、胎儿生长发育、干细胞分化具有重要的作用。骨损伤愈合是局部骨再发育并涉及多因素高度复杂的生物学过程。骨损伤修复与印记基因以及micro RNA之间关系的研究很少。本研究通过检测H19、miR-675、Grb10在骨愈合过程中的表达变化,探讨骨愈合相关细胞和印记基因和微小RNA的关系。研究方法:30只大鼠左后肢股骨骨缺损造模,右后肢股骨假手术,分别于5d、10d、15d、20d、25d断颈法处死,每个时间点取6只,取左右后肢股骨分别作为实验组和对照组,常规包埋,固定,切片。采用免疫组化染色观察Grb10蛋白的表达;采用免疫印迹测定Grb10蛋白表达;采用实时荧光定量PCR测定H19、Grb10、miR-675的表达。研究结果:免疫组化染色结果发现:Grb10蛋白在实验组5d和10d骨损伤愈合部位的表达量升高,平均光密度值显示实验组5d和10d蛋白表达量是对照组的两倍。实时荧光定量PCR结果发现:H19、Grb10、miR-675在5d到25d实验组和对照组中均有表达;损伤后5d,实验组H19表达量是对照组的两倍,损伤后10d,实验组H19表达量也是对照组的两倍;损伤后15d、20d、25d实验组和对照组的表达量基本持平;所有对照组miR-675表达基本一致,损伤后5d,实验组miR-675表达量是对照组的2.5倍,损伤后10d,实验组miR-675表达量升高,是对照组的3倍;15d、20d、25d、实验组和对照组的表达量基本持平;损伤后5d实验组Grb10的表达量是对照组的3倍,损伤后10d实验组表达量下降,与对照组相比,是对照组的三倍。免疫印迹结果发现:Grb10蛋白在损伤后5d表达量比对照组表达量升高了两倍,10d实验组蛋白表达量下降,相对于对照组也升高了约两倍,15d、20d、25d实验组和对照组蛋白含量基本一致。研究结论:1)H19、Grb10和miR-675促进骨细胞的增殖与分化,加速损伤的愈合进程。
【关键词】：骨愈合 印记基因 H19 miR-675 Grb10
【学位授予单位】：武汉体育学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R683
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 1 引言9-11
• 2 文献综述11-23
• 2.1 骨愈合11-12
• 2.2 印记基因12-17
• 2.2.1 印记的建立、维持和消除13-14
• 2.2.2 印记基因的调控机制14-16
• 2.2.3 印记基因和生长发育16-17
• 2.3 H19和miR-67517-19
• 2.3.1 H19结构17
• 2.3.2 H19印记调节17-18
• 2.3.3 H19基因功能18-19
• 2.4 miR-67519-20
• 2.5 Grb1020-23
• 2.5.1 Grb10结构20
• 2.5.2 Grb10功能20-23
• 3 实验材料和实验方法23-31
• 3.1 实验器材和主要的试剂23-26
• 3.1.1 实验器材23-24
• 3.1.2 主要试剂24-26
• 3.2 实验方法26-31
• 3.2.1 实验动物分组26
• 3.2.2 实验动物取材26-31
• 4 实验结果31-41
• 4.1 实时荧光定量PCR31-36
• 4.1.1 不同时期实验组和对照组H19 CT值情况见表 2-132-33
• 4.1.2 不同时期实验组和对照组Mir675 CT值情况见表 2-233-34
• 4.1.3 不同时期实验组和对照组Grb10 CT值情况见表 2-334-36
• 4.2 western blot36-37
• 4.2.1 Grb10蛋白在不同时期的表达36
• 4.2.2 Grb10蛋白表达情况见表 3-136-37
• 4.3 免疫组化37-41
• 4.3.1 Grb10在不同时期的表达37-38
• 4.3.2 Grb10平均光密度值见表 438-41
• 5 分析讨论41-45
• 5.1 骨损伤愈合过程41
• 5.2 H19、miR-675与细胞分化41-43
• 5.3 Grb10与细胞增殖43-45
• 6 结论45-47
• 参考文献47-59
• 致谢59-60

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