SIRT1调控凋亡对人退变终板软骨细胞的影响

发布时间：2017-09-11 12:13

  本文关键词：SIRT1调控凋亡对人退变终板软骨细胞的影响

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【摘要】：目的探讨人退变终板软骨(cartilage endplate,CEP)中凋亡和沉默信息调节因子2同源物1(silent information regulation 2homolog-1,SIRT1)的表达情况,探讨SIRT1是否可以抑制退变CEP细胞的凋亡。方法CEP取材于重庆医科大学附属第一医院腰椎间盘突出(lumbar disc herniation,LDH)和腰椎骨折(lumbar vertebrae fracture,LVF)的手术患者(时间从2014年6月到2015年5月),用Pfirrmann分级评价人椎间盘退变程度。HE染色观察正常和退变CEP的细胞形态和细胞数量,免疫组织化学观察正常和退变CEP中SIRT1,caspase3,Ⅱ型胶原的表达。单层培养CEP细胞,取p2代CEP细胞完成实验。细胞经过白藜芦醇和SIRT1干扰RNA或尼克酰胺处理后,westernblot检测SIRT1、Bcl-2和caspase3的表达,流式细胞学检测细胞凋亡率。结果HE染色结果表明终板组织细胞为类圆形软骨细胞类型,退变CEP细胞数量减少。免疫组织化学结果显示,退变CEP中SIRT1和Ⅱ型胶原的表达下降,凋亡相关因子caspase-3的表达上升。白藜芦醇处理CEP细胞后SIRT1和Bcl2的表达上升,凋亡相关蛋白caspase-3的蛋白表达下降,细胞凋亡率下降;经SIRT1干扰RNA或尼克酰胺处理后SIRT1和Bcl2的表达下降,caspase3表达上升,细胞凋亡率上升。结论CEP的退变与细胞凋亡有关,退变CEP细胞凋亡增加;SIRT1可以抑制退变CEP细胞的凋亡。
【关键词】：沉默信息调节因子2同源物1 CEP Bcl-2 caspase-3 凋亡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R681.5
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12-19
• 1.1 材料12-16
• 1.1.1 实验标本来源12-13
• 1.1.2 主要试剂13-15
• 1.1.3 主要仪器15-16
• 1.2 方法16-19
• 1.2.1 主要试剂的配制16-17
• 1.2.2 CEP组织的分离和细胞培养17
• 1.2.3 HE染色17-18
• 1.2.4 免疫组化18
• 1.2.5 si RNA转染18
• 1.2.6 流式细胞学18
• 1.2.7 Western blot检测18-19
• 1.2.8 统计学分析19
• 2 结果19-26
• 2.1 CEP收取情况19-20
• 2.2 典型的正常和退变CEP组织20
• 2.3 CEP HE染色结果20-21
• 2.4 免疫组织化学结果21-22
• 2.5 正常和退变CEP组织SIRT1和caspase3蛋白表达结果22-23
• 2.6 CEP细胞形态学观察23-24
• 2.7 SIRT1可以促进退变CEP细胞抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达，，抑制凋亡关键蛋白caspase-3 的表达24
• 2.8 SIRT1可以降低退变CEP细胞的凋亡率24-26
• 3 讨论26-29
• 参考文献29-32
• 文献综述32-37
• 参考文献35-37
• 致谢37-38
• 攻读硕士学位期间参与的科研项目及发表的学术论文38

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本文编号：830643