SNAP-25在大鼠脊髓损伤后的作用机制研究

发布时间：2017-09-18 23:05

  本文关键词：SNAP-25在大鼠脊髓损伤后的作用机制研究

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【摘要】：目的研究在大鼠脊髓钝挫伤后SNAP-25基因和蛋白的表达变化,探讨SNAP-25对大鼠脊髓钝挫伤后感觉功能和运动功能的影响,探讨调控SNAP-25的信号通路。方法Sprague-Dawley(SD)大鼠124只随机被分为假手术组(sham)和脊髓损伤组,脊髓损伤组分为1天组(1d),3天组(3d),7天组(7d),14天组(14d)和28天组(28d)等亚组。首先,采用改良的Allen’s方法制备大鼠脊髓钝挫伤模型,用基因芯片技术筛选脊髓损伤后的差异表达基因,采用标准富集计算方法对差异基因进行GO分析;其次,用q RT-PCR和免疫印迹实验检测SNAP-25的基因和蛋白的表达变化;采用免疫组织化学技术观察SNAP-25在损伤脊髓中的定位表达。再次,采用温痛觉和BBB评分评估大鼠脊髓损伤后感觉功能和运动功能变化;最后,用生物信息学方法预测调控SNAP-25的信号通路。结果1.基因芯片筛选脊髓损伤后差异表达的基因用基因芯片技术筛选脊髓损伤段的差异表达基因,结果表明脊髓损伤组与sham组比较获得262个具有差异表达的基因,其中有249个都属于下调表达的基因。根据下调基因的表达量和基因分布的生物学途径等,SNAP-25、PEBP1、SNCB和AQP4被选出用于下一步验证。2.差异表达基因的验证q RT-PCR验证筛选的差异表达基因,结果显示SNAP-25,PEBP1,SNCB以及AQP4基因在脊髓损伤组表达比sham组降低,差异具有统计学意义(P0.001)。结合生物信息学分析和前期实验结果,我们选择SNAP-25作为本课题的研究因子。3.差异基因SNAP-25在脊髓钝挫伤后表达变化q RT-PCR结果显示SNAP-25 m RNA在脊髓钝挫伤后1d,3d,7d,14d和28d表达明显降低,变化差异具有统计学意义(P0.05)。免疫印迹实验结果显示SNAP-25蛋白水平在脊髓钝挫伤后1d,3d,7d,14d和28d的表达也降低,并且在3d,7d,14d和28d与sham组比较具有明显差异,差异具有统计学意义(P0.05)。4.SNAP-25蛋白的定位表达免疫组织化学结果显示SNAP-25在大鼠脊髓后角神经胶质细胞和突起中表达,在损伤后的各个检测时间点SNAP-25免疫阳性物的灰度值降低,差异具有统计学意义(P0.05)。此外,SNAP-25在脊髓前角神经胶质细胞突起和神经元的胞浆中表达,并且SNAP-25免疫阳性细胞数在脊髓损伤后1d,3d,14d和28d表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。5.脊髓损伤后大鼠感觉功能的变化温痛觉功能测试结果显示大鼠后肢痛觉潜伏期在脊髓损伤后缩短。随着时间的改变,sham组和脊髓损伤组的后肢痛觉潜伏期逐渐恢复。大鼠后肢痛觉潜伏期在脊髓损伤后7d,14d,21d和28d均低于sham组的潜伏期,并且差异具有统计学意义(P0.05)。6.脊髓损伤后大鼠运动功能的变化BBB评分结果显示大鼠后肢运动功能评分在脊髓损伤后急剧降低,在1d,7d,14d,21d和28d均低于sham组评分,差异具有统计学意义(P0.001)。7.脊髓损伤后调控SNAP-25的信号通路生物信息学分析表明SNAP-25与STAT3有关系,结果提示STAT3信号通路可能调控SNAP-25对脊髓损伤后的感觉和运动功能的作用。q RT-PCR实验和免疫组织化学技术进一步验证脊髓损伤后STAT3基因表达降低,STAT3蛋白在脊髓神经元中表达,结果提示STAT信号通路调控SNAP-25发挥的作用功能。结论1.用基因芯片的方法筛选获得在脊髓损伤后差异表达的基因SNAP-25。2.在脊髓损伤后SNAP-25的基因和蛋白表达下降。3.在脊髓损伤后,SNAP-25在脊髓后角神经元和神经胶质细胞中表达减少,温痛觉测试结果显示后肢感觉功能障碍,因此,SNAP-25可能影响大鼠脊髓损伤后的感觉功能。4.在脊髓损伤后,SNAP-25在脊髓前角运动神经元和神经胶质细胞中的表达下降,大鼠后肢运动功能障碍,因此,SNAP-25可能对大鼠脊髓损伤后的运动功能有影响。5.大鼠脊髓损伤后,STAT3可能通过调控SNAP-25影响大鼠脊髓损伤后的感觉功能和运动功能。
【关键词】：脊髓损伤 SNAP-25 感觉功能 运动功能
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 中英文缩写词对照表4-8
• 摘要8-11
• Abstract11-14
• 前言14-16
• 第一部分 大鼠脊髓损伤后差异基因的筛选和验证16-29
• 1 引言16-17
• 2 实验材料与方法17-21
• 2.1 实验材料17-19
• 2.2 实验方法19-21
• 3 实验结果21-26
• 3.1 差异基因的筛选及分析21-25
• 3.2 差异基因的筛选25-26
• 3.3 差异基因的验证26
• 4 讨论26-27
• 5 结论27-29
• 第二部分SNAP-25在大鼠脊髓钝挫伤后的表达变化29-53
• 1 引言29-30
• 2 实验材料与方法30-43
• 2.1 实验材料与试剂30-34
• 2.2 实验方法34-43
• 3 结果43-49
• 3.1 SNAP-25在大鼠脊髓内的基因和蛋白水平的表达变化43-44
• 3.2 SNAP-25在大鼠脊髓后角的定位表达44-45
• 3.3 大鼠脊髓损伤后温痛觉的变化45-46
• 3.4 SNAP-25在大鼠脊髓前角的定位表达46-48
• 3.5 大鼠脊髓损伤后运动功能的变化48-49
• 4 讨论49-52
• 4.1 SNAP-25基因和蛋白在脊髓损伤后的表达变化和意义49-50
• 4.2 SNAP-25在大鼠脊髓后角的表达以及对痛觉功能的影响50-51
• 4.3 SNAP-25在大鼠脊髓前角的表达以及对运动功能的影响51-52
• 5 结论52-53
• 第三部分 STAT3信号通路调控SNAP-25影响大鼠脊髓钝挫伤后功能的恢复53-60
• 1 引言53-54
• 2 方法54
• 2.1 生物信息学分析54
• 2.2 qRT-PCR54
• 2.3 免疫组织化学技术54
• 3 结果54-58
• 4 讨论58-59
• 5 结论59-60
• 参考文献60-67
• 文献综述67-76
• 参考文献72-76
• 攻读学位期间的研究成果76-77
• 致谢77

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本文编号：878033