孕晚期吗啡暴露对子代鼠成瘾易感性及伏隔核NR2A和NR2B表达的影响

发布时间：2017-09-22 17:17

  本文关键词：孕晚期吗啡暴露对子代鼠成瘾易感性及伏隔核NR2A和NR2B表达的影响

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【摘要】：目的:产前吗啡暴露不仅会严重影响身心健康,且作用长久,乃至会影响下一代脑结构和行为的改变。相关文献证明:胚胎期被动暴露于吗啡的新生大鼠会有行为和大脑神经化学递质的改变,其中包括吗啡心理依赖;且发现孕晚期吗啡暴露可使伏隔核和杏仁核的阿片受体增加,而伏隔核和杏仁核都是与调控成瘾药物奖赏效应的脑奖赏通路密切相关的。于是,我们推测:产前吗啡暴露可使子代鼠的成瘾易感性得到明显增强。本实验运用条件位置偏爱模型来检测子代鼠的成瘾易感性,并通过检测伏隔核NR2A和NR2B的表达来探究其神经生物学机制。本实验目的主要包括:(1)大鼠孕晚期吗啡暴露模型的建立;(2)探究孕晚期吗啡暴露对子代鼠体重及其死亡率的影响;(3)关于孕晚期吗啡暴露对子代鼠成瘾易感性影响的研究;(4)检测孕晚期吗啡暴露的子代鼠伏隔核NMDA受体亚基NR2A和NR2B的表达,从而进一步研究孕晚期吗啡暴露致子代鼠成瘾易感性增加的神经生物学机制。方法:孕14d的SD大鼠采用随机数字表法分为2组,对照组(C组)和吗啡组(M组)。M组于孕14~20天颈背部皮下注射吗啡,每天2次(9:00 am和5:00 pm),吗啡的首日剂量为2mg/kg,逐日递增1mg/kg,至6mg/kg维持;C组采用同样方法用生理盐水替代吗啡。(1)对两组子代鼠出生时的体重、4周体重、8周体重进行称重并统计出生后3天、4周及8周的死亡率;(2)随机选取上述2组中子代鼠正常喂养到8周后进行以下实验步骤:1)预实验阶段(1-3d)每组子代鼠在箱的两侧自由活动15min,1次/d,连续3d,从而使其适应实验箱环境;并将第2,3天每天大鼠在箱两侧停留时间的平均值记为CPP基线值(T0)。将其停留时间长的一侧箱记为偏爱箱,停留时间短的一侧箱记为伴药箱(大鼠在注射吗啡后放入该侧)来训练大鼠。2)条件化训练阶段(4-10d)将每组子代鼠皮下注射吗啡后放入伴药箱45min,在间隔8h以同样的方法注射同体积的生理盐水后放入偏爱侧45min。吗啡的剂量恒定为3mg/kg,连续训练7天。3)测试阶段(11d)每组子代鼠放在实验箱两侧自由活动15min,将其在伴药侧的停留时间记为CPP测试值(T1)。子代鼠的成瘾易感性可通过CPP分值(T=T1-T0)来进行评价。我们根据CPP分值(T)的大小将M组子代鼠按20%、60%、20%的比例分为高偏爱组(H)、中偏爱组、低偏爱组(L)。为了更为明显的比较子代鼠吗啡成瘾易感性的差异,我们仅对高偏爱组(H)、低偏爱组(L)与对照组(C)的子代鼠进行比较研究。(3)H组,L组和N组每组随机取出10只子代鼠,麻醉后断头取其伏隔核组织;(4)免疫组化法检测各组子代鼠伏隔核NR2A和NR2B的表达。(5)Westernblot-ting法检测各组子代鼠伏隔核NR2A和NR2B的表达。结果:(1)经各组子代鼠称重发现:出生体重M组小于N组(P0.01),出生4周及8周体重M组均小于N组(P0.01)。M组出生3天、4周、8周死亡率均明显高于N组(P0.01)。(2)经过连续7天的吗啡条件化训练后,与C组子代鼠比较,M组子代鼠在伴药侧的停留时间明显延长(P0.01);H组子代鼠CPP分值明显高于L组和C组的子代鼠(P0.01,P0.01),差异有统计学意义。(3)免疫组化结果示H组子代鼠伏隔核内NR2A及NR2B的表达明显高于L组和C组(P0.01)。(4)Westernblotting结果示H组子代鼠伏隔核内NR2A及NR2B的表达明显高于L组和C组(P0.01)。结论:(1)孕晚期吗啡暴露会导致子代鼠体重在不同年龄段的减轻且会增加其生长发育过程中不同时期的死亡率。(2)孕晚期吗啡暴露对子代鼠成瘾易感性有明显的增强作用。(3)孕晚期吗啡暴露致子代鼠成瘾易感性增强可能与伏隔核内NR2A和NR2B的水平上调有关。
【关键词】：妊娠 吗啡 CPP N-甲基-D-天冬氨酸 伏隔核
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 英文缩略词5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-14
• 前言14-19
• 材料与方法19-29
• 1. 研究材料19-22
• 1.1 实验动物19-20
• 1.2 主要实验药物和试剂20-21
• 1.3 主要实验仪器21-22
• 2. 实验方法22-28
• 2.1 孕晚期吗啡暴露对子代鼠体重及死亡率的影响22
• 2.1.1 建立孕晚期吗啡暴露模型22
• 2.1.2 检测子代鼠的体重及其死亡率22
• 2.2 条件位置偏爱实验22-24
• 2.2.1 主要实验装置22-23
• 2.2.2 实验过程23-24
• 2.3 免疫组化法检测子代鼠伏隔核内NR2A及NR2B的表达24-25
• 2.3.1 伏隔核标本的制作24
• 2.3.2 免疫组化法步骤24-25
• 2.4 Western-blot法检测子代鼠伏隔核内NR2A及NR2B的表达25-28
• 2.4.1 主要实验过程25-26
• 2.4.2 提取蛋白26
• 2.4.3Western操作流程26-28
• 3. 统计方法28-29
• 结果29-37
• 1. 孕晚期吗啡暴露对子代鼠体重及其死亡率的影响29-30
• 2. 孕晚期吗啡暴露对子代鼠吗啡成瘾易感性的影响30-32
• 3. 孕晚期吗啡暴露对子代鼠伏隔核NR2A和NR2B表达的影响32-37
• 3.1 免疫组化结果32-33
• 3.2 Western-blot结果33-37
• 讨论37-45
• 结论45-46
• 参考文献46-55
• 综述 NMDA受体在阿片成瘾中的作用55-69
• 参考文献62-69
• 作者简介及读研期间主要科研成果69-70
• 致谢70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 陈镇燕;李婧;黄光英;;Effect of Bushen Yiqi Huoxue Recipe on Placental Vasculature in Pregnant Rats with Fetal Growth Restriction Induced by Passive Smoking[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2013年02期

2 姚亚丽;曹文宇;徐杨;钟小林;罗雁威;刘丹;李芳;张建一;李昌琪;;大鼠配对前经历吗啡成瘾及戒断对子代掠食行为的影响[J];中国药物依赖性杂志;2011年06期

3 宋月晗;李峰;刘晓兰;刘洋;焦莹;赵雪松;刘燕;张蓉;;大鼠吗啡精神依赖时伏核和前额叶皮质中NR2A、NR2B表达的变化[J];中国药物依赖性杂志;2008年06期

4 黄春桃;吴锡南;刘苹;;N-甲基-D-天冬氨酸受体在中枢神经系统的研究进展[J];中国行为医学科学;2006年04期

5 郑明岚,朱永平;谷氨酸递质在药物成瘾中的作用[J];国外医学(卫生学分册);2005年03期

6 张瑞岭,郝伟,刘克菊,岳伟华,徐锡萍;NMDA受体在慢性吗啡处理大鼠伏隔核神经元突触可塑性改变中的作用[J];中国临床康复;2004年13期

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本文编号：902074