骨肉瘤细胞CD44v2、CD44v5及CD44v6的表达及与细胞增殖、迁移的关系

发布时间：2017-10-02 19:25

  本文关键词：骨肉瘤细胞CD44v2、CD44v5及CD44v6的表达及与细胞增殖、迁移的关系

  更多相关文章： 骨肉瘤 CD44v2 CD44v5 CD44v6 生长曲线 细胞周期 划痕实验 荧光定量PCR

【摘要】：目的:CD44变异体包括CD44v1、v2、v3、v4、v5、v6、v7、v8、v9、v10等,CD44变异体在肿瘤细胞的表达具有组织特异性。目前人们认为骨肿瘤表达与CD44各变异体的表达紧密相关,并认为CD44变异体的表达与骨肉瘤恶性程度、侵袭、转移等有关。有国内外文献研究观察了骨肉瘤中CD44v5、CD44v6的表达,而CD44v2与骨肉瘤的关系并不十分清楚。本实验旨在通过q PCR技术及细胞培养检测3种不同的骨肉瘤细胞(MG-63、U-2OS、Saos-2)中变异体CD44v2、CD44v5及CD44v6的表达情况,以及通过生长曲线、细胞周期和划痕实验判断3种不同的骨肉瘤细胞增殖、迁移能力的差异。应用统计学方法进行相关分析,探究这些变异体在不同骨肉瘤细胞表达分布,与细胞生长、增殖以及迁移能力的关系。方法:1.应用MTT法,在1-7天分别检测U-2OS、MG-63、Saos-2骨肉瘤细胞活力,并依次绘制生长曲线;2.应用流式细胞术分别测定U-2OS、MG-63、Saos-2细胞周期的变化;3.利用划痕实验观察U-2OS、MG-63、Saos-2细胞迁移能力;4.分别提取U-2OS、MG-63、Saos-2细胞RNA,逆转录为c DNA,设计q PCR引物,应用q PCR与荧光定量检测3种骨肉瘤细胞CD44v2、CD44v5、CD44v6m RNA的表达;5.应用IDEAS软件计算出各基因在各标本中的CT值,以U-2OS作为对照标准,应用2-△△CT方法计算出各个基因在各标本中表达的相对定量,用均数±标准差(x±s)来表示各个基因在各组标本中表达的相对定量值,进行相关性分析。结果:1.依据生长曲线结果显示骨肉瘤细胞MG-63增殖能力,生长速率高于U-2OS及Saos-2,骨肉瘤细胞U-2OS增殖能力,生长速率高于Saos-2。其中骨肉瘤细胞MG-63与Saos-2相比P0.05有统计学意义。2.细胞周期结果显示:MG-63细胞在G0/G1期数值63.4%,S期18.5%,G2/M期18.1%。U-2OS细胞在GO/G1期数值43.5%,S期30.3%,G2/M期22.3%。Saos-2细胞在GO/G1期数值28.1%,S期35.3%,G2/M期36.5%。由以上结果可知,MG-63细胞中G0/G1期的细胞比例略大于U-2OS细胞和Saos-2细胞。3.根据划痕试验结果显示细胞迁移速度由快到慢为MG-63U-2OSSaos-2。4.q PCR相对定量结果显示CD44v2在骨肉瘤细胞MG-63表达最高,约分别是U-2OS及Saos-2细胞的94倍与70倍;CD44v5在骨肉瘤细胞MG-63中表达分别高于U-2OS及Saos-2细胞7.4倍与11.1倍;CD44v6在骨肉瘤细胞MG-63中的表达分别高于U-2OS及Saos-2细胞10倍与2.1倍。同时发现CD44v2在骨肉瘤细胞U-2OS与Saos-2中的表达没有明显差异;CD44v5和CD44v6在骨肉瘤细胞U-2OS中的表达高于Saos-2。由此推测骨肉瘤细胞的细胞活力和迁移能力可能与CD44v2的表达程度成正比。结论:1.三种骨肉瘤细胞的增殖、迁移能力不同:MG-63增殖速度最快,U-2OS次之,Saos-2最慢;MG-63迁移能力最快,U-2OS次之,Saos-2最慢。2.CD44v2、CD44v5、CD44v6在不同骨肉瘤细胞的表达有差异:其中CD44v2在MG-63表达最高,U-2OS次之,Saos-2最低。CD44v6在骨肉瘤MG-63细胞MG-63中表达高于U-2OS及Saos-2。CD44v5和CD44v6在骨肉瘤细胞U-2OS表达高于Saos-2。由此推测骨肉瘤细胞的细胞活力和迁移能力可能与CD44v2的表达程度成正比。3.骨肉瘤细胞的增殖、迁移能力不同可能与CD44v2、CD44v5、CD44v6基因的表达有关,但这些变异体之间的相关性需要进一步实验验证。
【关键词】：骨肉瘤 CD44v2 CD44v5 CD44v6 生长曲线 细胞周期 划痕实验 荧光定量PCR
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-13
• 第1章 引言13-14
• 第2章 文献综述14-19
• 2.1 骨肉瘤及其流行病学研究14
• 2.2 CD44的基因结构及表达14-15
• 2.3 CD44与骨肉瘤及相关肿瘤关系的研究15-17
• 2.4 CD44与骨肉瘤最新研究17
• 2.5 小结17-19
• 第3章 材料与方法19-22
• 3.1 研究材料19
• 3.2 主要试剂及器材19
• 3.2.1 主要试剂19
• 3.2.2 主要仪器19
• 3.3 研究方法和步骤19-22
• 3.3.1 骨肉瘤细胞株生长曲线测定19-20
• 3.3.2 骨肉瘤细胞株细胞周期检测20
• 3.3.3 划痕实验20
• 3.3.4 U-2OS、MG-63、Saos-2 细胞RNA的提取20
• 3.3.5 U-2OS、MG-63、Saos-2 细胞RNA逆转录为cDNA20-21
• 3.3.6 引物设计21
• 3.3.7 实时荧光定量PCR21
• 3.3.8 统计分析21-22
• 第4章 结果22-27
• 4.1 骨肉瘤细胞活力的变化22-23
• 4.2 骨肉瘤细胞周期的变化23
• 4.3 骨肉瘤细胞迁移能力检测23-24
• 4.4 骨肉瘤细胞中RNA质量的检测24
• 4.5 骨肉瘤细胞中 CD44v2、CD44v5 和 CD44v6 基因表达的检测24-25
• 4.6 CD44v2、CD44v5和CD44v6 引物特异性的检测25
• 4.7 骨肉瘤细胞中 CD44v2、CD44v5 和 CD44v6 各基因相对定量值的变化25-27
• 第5章 讨论27-29
• 第6章 结论29-30
• 参考文献30-33
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果33-34
• 致谢34

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李健,郭卫,杨荣利,曲华毅,樊瑞峰;影响骨肉瘤预后因素的探讨[J];中国骨肿瘤骨病;2004年06期

2 鲍同柱,赵红卫,郑启新,刘万军,刘勇;反义转化生长因子-β1基因对骨肉瘤细胞表达转移相关因子的影响[J];中华实验外科杂志;2005年04期

3 牛聚伟;吴刚;祝少博;漆白文;钱炜;喻爱喜;;血管扩张刺激磷蛋白与骨肉瘤细胞迁移能力的关系[J];武汉大学学报(医学版);2012年06期

4 孟令祥,于锡欣,杜德利,王冠忠;P~(16)基因在骨肉瘤中的表达[J];山东医药;1999年06期

5 林娜,蔡宣松,梅炯;骨肉瘤预后因素探讨[J];实用肿瘤杂志;2000年05期

6 姜文学,董天华,吴士良,马文雄;骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞的诱导及其抗肿瘤特性的研究[J];中华骨科杂志;2000年01期

7 马忠泰,栗怀广,施学东;骨肉瘤的化疗与疗效判断[J];中华骨科杂志;2000年S1期

8 岳文,杨连甲,马明,董绍忠;体内和体外实验观察骨形成蛋白在骨肉瘤中的作用[J];口腔颌面外科杂志;2000年03期

9 姜文学,董天华,吴士良,马文雄;体外诱导骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞的实验研究[J];中国矫形外科杂志;2000年03期

10 郭乔楠,陈意生;骨肉瘤细胞增殖活性的测定及其与预后的关系[J];中国现代医学杂志;2000年12期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李红;龙勉;;力学微扰对骨肉瘤细胞生物学行为的影响[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

2 金先庆;罗小辑;;骨肉瘤细胞骨分化标志检测及临床意义[A];中国抗癌协会第七届全国小儿肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年

3 李进;杨述华;邹利军;邵增务;廖翔;;单启动子双表达载体pIRES-p14ARF-p53的构建及其对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用[A];泛长江流域骨科新进展暨第九届全国骨科护理研讨会论文汇编[C];2007年

4 李进;杨述华;邹利军;邵增务;廖翔;;单启动子双表达载体pIRES-p14ARF-p53的构建及其对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用[A];第八届全国脊柱脊髓损伤学术会议论文汇编[C];2007年

5 胡宏伟;孙其志;;骨肉瘤的治疗进展[A];第十七届中国康协肢残康复学术年会暨第三届海峡两岸OS会议论文汇编[C];2008年

6 于秀淳;王伟;;影响骨肉瘤新辅助化疗疗效的多因素分析[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议教育集[C];2006年

7 张瑶;;四肢长骨骨肉瘤合并病理性骨折围手术期的护理[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2006年

8 张瑶;;四肢长骨骨肉瘤合并病理性骨折围手术期的护理[A];全国第八届骨科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2006年

9 张志明;;外伤诱发骨肉瘤一例分析[A];第四次全国法医学术交流会论文集（上卷）[C];1991年

10 杨迪生;解先宽;叶招明;陶惠民;;反义C-myc重组腺病毒的构建及其抗骨肉瘤细胞作用的实验研究[A];2004年浙江省骨科学术会议论文汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 任勇 李运红 胡颜;莫名关节痛青少年警惕骨肉瘤[N];天津日报;2006年

2 黄金昶;骨肉瘤可试用斑蝥治疗[N];健康报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘巍;UHRF1在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用及其机制研究[D];山西医科大学;2015年

2 陈杰;HDAC5在骨肉瘤细胞增殖中的表观遗传学调控研究[D];复旦大学;2014年

3 马万里;miR-148a在骨肉瘤患者体内的表达及其功能机制的研究[D];山东大学;2015年

4 田吉光;CD271~+骨肉瘤干细胞特性研究及以DNA-PK为靶点逆转骨肉瘤化疗耐药性的研究[D];山东大学;2015年

5 成功;内脏脂肪素对U2OS细胞株迁移与侵袭的影响及其机制的实验研究[D];南方医科大学;2015年

6 方永超;环氧化酶-2和miR-143在骨肉瘤中的表达和临床意义[D];南方医科大学;2015年

7 赵健;microRNA-21在骨肉瘤细胞MG63中作用机制的研究[D];第四军医大学;2015年

8 韩康;microRNA-194在骨肉瘤中作用及机制的研究[D];第四军医大学;2015年

9 朱U，

本文编号：961419