大鼠PAX6基因真核表达载体构建及鉴定

发布时间：2017-12-08 05:18

  本文关键词：大鼠PAX6基因真核表达载体构建及鉴定

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【摘要】：目的:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因及PAX6基因的重组真核表达载体,观察其在人胚肾细胞(293FT)细胞中的表达。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)从大鼠脑组织中获取PAX6基因,经连接T载体测序验证正确后,与真核表达载体p EF1α-IRES-Ac GFP经Sal I/Bam HI双酶切后;经T4 DNA连接酶连接,获得重组质粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP,用菌液PCR、Sal I/Bam HI双酶切及测序鉴定正确后,用脂质体法转染293FT细胞,采用倒置荧光显微镜观察GFP的表达、蛋白印迹(Western blot)法检测PAX6蛋白表达。结果:重组质粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP经RT-PCR和双酶切均得到大小为1 269 bp的目的条带,测序鉴定该序列与Gen Bank中大鼠PAX6基因序列的同源性达100%,插入基因的大小和方向正确;重组质粒转染293FT细胞后可见GFP绿色荧光,Western blot显示PAX6蛋白表达。结论:成功构建了PAX6真核表达重组质粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP,能在293FT细胞中表达PAX6蛋白。
【作者单位】： 贵州医科大学组织学与胚胎学教研室;
【基金】：贵州省科技厅基金[黔科合J字(2015)2011号] 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目[黔省专合字(2012)41号]
【分类号】：R772.2
【正文快照】： 角膜盲是最重要的致盲眼病之一,全球约有超过1 000万的角膜盲患者,我国现有角膜盲患者约300多万,每年新发的感染性角膜病致盲患者约10万人[1]。然而,角膜供体的极度匮乏,是造成角膜盲得不到及时治疗的主要原因之一。位于角巩膜交界处的角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs)是

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2 韩海斌;杨建立;丁玉;温子玉;;PAX6基因多态性与精神分裂症的关系探讨[J];山东医药;2014年12期

3 陆玉凤;刘丽梅;;Pax6基因突变与胰腺发育和糖尿病发生关系的研究进展[J];上海交通大学学报(医学版);2011年05期

4 刘卫华;刘漪沦;刘海荣;罗永慧;徐金眉;;Pax6基因转染对脂肪来源间充质干细胞的诱导分化研究[J];中国修复重建外科杂志;2014年08期

5 杨珂;杨恬;姜自玲;;Pax6基因和蛋白在大鼠触须毛囊中的表达[J];第三军医大学学报;2008年13期

6 ;[J];;年期

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1 孙霞;PAX6基因单核苷酸多态性与精神分裂症的关联性研究[D];天津医科大学;2013年

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本文编号：1265178