TLR4、MyD88mRNA在胆脂瘤型中耳炎中的表达及意义

发布时间：2018-03-16 15:55

本文选题：中耳胆脂瘤　切入点：TLR4　出处：《山西医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景中耳胆脂瘤是一种位于中耳内的囊性结构，而非真性肿瘤，但它具有类似肿瘤的持续生长及破坏能力，常引起一系列严重的颅内外并发症，危及生命，因此一直受到国内外专家的广泛关注。后天性胆脂瘤发病机理存在争议已有一个世纪，至少已证实存在有四个方面证据,但现在唯一达成共识的是机体为防御慢性炎症而产生的一系列异常免疫应答，造成胆脂瘤持续发展及骨质破坏。Toll样受体(toll-like receptors，TLRs)是先天性免疫模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)之一，通过识别病原微生物及其病原相关分子模式(pathogen associated molecularpatterns，PAMPs)快速激活天然免疫系统。现M Szczepanski，WSzyfter等研究发现TLR（TLR-2，TLR-3，TLR-4）在胆脂瘤微环境中表达丰富，提示Toll样受体4有可能参与了中耳胆脂瘤的发生发展过程。本实验拟采用SYBR Green实时定量反转录聚合酶链反应(SYBR RT-PCR)方法,观察炎症反应程度不同的中耳胆脂瘤组织中TLR4的表达及其下游传导分子MyD88的表达，进一步探讨TLR4信号转导途径在中耳胆脂瘤发生发展过程中的作用，深入了解中耳胆脂瘤发病机制，并为找寻中耳胆脂瘤有效的保守治疗方法提供新的途径。方法选择中耳胆脂瘤组织标本35例，均来自山西医科大学第二医院耳鼻咽喉-头颈外科住院患者35例（男13例，女22例，年龄16—62岁)平均37.12岁，耳流脓史1个月～30年，平均5.14年；其中听骨无破坏者8例，破坏一个听骨者8例，破坏两个听骨者13例，破坏三个听骨者6例。然后我们根据显微镜下所见上皮下基质炎症反应的程度，在手术中取标本时即分为炎症组与非炎症组，其中炎症组占13份，非炎症组占12份。对照组标本取自中耳乳突根治术中正常外耳道皮肤组织10例。上述所有标本在收集后立即在显微镜下仔细剔除中耳胆脂瘤鳞屑及其他坏死组织，置于-80℃冰箱保存，以备用作RT-PCR检测。所有选取患者术前均行颞骨高分辨CT检查，术后病理活检均证实为后天继发性胆脂瘤。采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）直接检测炎症组、非炎症组、正常对照组TLR4、MyD88 mRNA的表达。结果 1、Real time -PCR方法直接检测三组实验样本TLR4mRNA，炎症组TLR4平均2-~(ΔΔCT)值为0.689（0.200,2.050），非炎症组TLR4平均2-~(ΔΔCT)值为0.291（0.020,0.990），正常对照组TLR4、平均2-~(ΔΔCT)值为0.163（0.001,0.990）。 2、Real time -PCR方法直接检测三组实验样本MyD88mRNA的表达显示：炎症组为MyD88平均2-~(ΔΔCT)值0.777（0.320，1.84）；非炎症组MyD88平均2-~(ΔΔCT)值为0.320（0.01,0.990），正常对照组MyD88平均2-~(ΔΔCT)值为0.224（0.002,0.990）。 3、炎症组TLR4、MyD88mRNA表达水平较正常外耳道组分别上升了4倍和3倍，，且差异有统计学意义（p值均0.05）;炎症组TLR4、MyD88mRNA表达水平较非炎症组分别上升了2倍和1倍，且差异有统计学意义(p值均0.05)。 4.我们将TLR4与MyD88做spearman秩相关性分析，相关系数为r=0.955，P值0.05。表明在胆脂瘤型中耳炎发病过程中，在基因水平，TLR4与MyD88是呈正相关的。结论 1、中耳胆脂瘤组织中有TLR4mRNA、MyD88mRNA的表达。 2、中耳胆脂瘤组织中，尤其是炎症反应明显的胆脂瘤组织，TLR4及其下游信号转导分子的表达量发生改变，提示胆脂瘤型中耳炎的发病确实与炎症程度密切相关。 3、炎症反应明显的胆脂瘤上皮组织中TLR4表达上调，同时它的下游传导分子MyD88表达增强，两者呈正相关。因此我们推论TLR4-MyD88信号传导途径可能是胆脂瘤发病的一个重要机制。
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【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R764

【引证文献】