儿茶素对糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C及热休克蛋白27变化的影响

发布时间：2018-04-01 11:21

本文选题：儿茶素　切入点：糖尿病视网膜病变　出处：《河北医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是糖尿病(diabetesmellitus,DM)最常见和严重的微血管并发症之一，它是在眼内视网膜组织中发生的渗漏性、闭塞性和增殖性的微血管病变,是重要的致盲性眼病，在糖尿病患者不断增加的今天，加强糖尿病眼病的防治工作已经成为当务之急。目前关于DR发病机制尚未完全明了，近年来甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)信号通路的激活,在DR发生及发展中的作用日益引起大家的重视。DM状态下，细胞内葡萄糖含量增高，引起DAG合成增多,DAG作为PKC的激动剂,可导致PKC活性增强。激活的PKC的可引起视网膜组织细胞改变、视网膜基底膜增厚、视网膜组织中血管的渗透性增强以及新生血管形成。热休克蛋白（heatshockprotein,HSP）是生物体内进化保守的蛋白家族,多种因素可诱导其产生,该家族蛋白是重要的分子伴侣,具有多种生物学作用。HSP27是小HSP家族成员之一,正常状态下在细胞内呈低水平表达,当遭遇应激刺激时表达量增高,以发挥抗氧化损伤的作用。许多植物中存在PKC抑制剂，儿茶素作为天然植物提取物中药理功能的主要成分，，因含酚性羟基而极易发生氧化、聚合、缩合等变化,具有较好的抗氧化、清除自由基的能力,且安全、无毒、用量少，并具有抗肿瘤、抗基因突变、抗菌消炎、抗动脉粥样硬化、抗氧化、降压、降糖等多种生物学功能。已有研究发现儿茶素对视神经具有保护作用[1]，但对糖尿病视网膜病变的研究尚未见报道。本实验通过制作大鼠糖尿病模型，观察视网膜组织中PKC、HSP27的改变并给予全身应用儿茶素进行干预，探讨儿茶素对糖尿病视网膜病变的作用。方法：选用健康雄性SD大鼠54只，体重175±15g,随机分为3组，即正常对照组（正常组）18只(36眼),糖尿病对照组（对照组）18只(36眼)和儿茶素治疗组（治疗组）18只(36眼)。对照组和治疗组大鼠制作糖尿病模型：两组大鼠禁食过夜后，按65mg"kg体重一次性左腹腔内注射链脲菌素（streptozotocin，STZ）,72h后通过尾静脉取血测血糖,以血糖高于16.7mmol/L,作为糖尿病大鼠模型。三组大鼠均自由进食标准鼠食和水，治疗组大鼠给予儿茶素200mg/kg（以蒸馏水溶解）灌胃,1次/d;正常组、对照组给予等量蒸馏水灌胃，1次/d。每周监测血糖、体重。分别于造模成功后第2w、第4w、第8w取正常组、对照组及治疗组大鼠各6只,以水合氯醛麻醉,快速取双侧眼球，每只大鼠一眼在解剖显微镜下将大鼠眼球沿赤道部切开，去除角膜和晶状体，冷生理盐水冲洗玻璃体，用眼科显微镊剥离视网膜，制作视网膜匀浆以酶联免疫吸附法测定大鼠视网膜组织中PKC的表达，另一眼迅速投入固定液固定24h，用于免疫组织化学染色观察HSP27的变化。结果均以均数±标准差表示，应用SPSS13.0统计分析软件进行统计学分析。结果: 1.各组大鼠各时间点血糖、体重比较：糖尿病模型诱导成功后在实验的各时间点，对照组、治疗组大鼠血糖水平均较正常组高，有非常显著性差异（p0.01),治疗组与对照组大鼠血糖水平相比，第2w、第4w无统计学意义（p0.05)，第8w较对照组大鼠血糖水平降低，有显著性差异（p0.01)。实验过程中，糖尿病大鼠体重减轻，治疗组、对照组与正常组相比各时间点均有显著性差异（第2wp0.05，p0.01；第4w及第8wp0.01)；治疗组与对照组相比，在第2w、第4w体重无显著性差异（p0.05)，第8w治疗组大鼠体重减轻程度较对照组变小，有统计学意义（p0.01)。 2.各组大鼠视网膜组织中PKC活性比较：糖尿病模型诱导成功后，第2w、第4w、第8w：对照组大鼠视网膜组织中细胞膜PKC活性较正常组显著增高（p0.01)，治疗组大鼠视网膜组织中细胞膜PKC活性在第2w、第4w与对照组相比无显著性差异（p0.05)，但在第8w治疗组视网膜组织中细胞膜PKC活性明显低于对照组，差异有统计学意义（p0.01)。在实验的各时间点，正常组、对照组与治疗组大鼠视网膜细胞浆中PKC活性差异均无统计学意义（p0.05)。 3.各组大鼠视网膜组织中HSP27免疫组织化学染色分析：视网膜组织中HSP27的阳性表达主要位于视网膜神经节细胞和神经纤维层中,表达阳性的细胞胞浆呈棕黄色,视网膜其余各层中未见明显HSP27阳性表达。正常组大鼠仅见少量表达。对照组、治疗组大鼠视网膜组织中HSP27阳性表达在实验的第2w、第4w、第8w均较正常组明显增加，有非常显著性差异（p0.01)；治疗组与对照组相比，在第2w、第4w明显增加，有统计学意义（p0.05)，第8w无显著性差异（p0.05)。结论： 1.糖尿病大鼠视网膜组织中细胞膜PKC的活性增强；糖尿病大鼠视网膜组织中HSP27的表达增加。 2.全身应用儿茶素，可抑制糖尿病大鼠视网膜组织中PKC的活性，在糖尿病早期对HSP27的表达有促进作用。 3.全身应用儿茶素可降低糖尿病大鼠血糖水平，改善糖尿病大鼠多饮、多食、多尿及体重减轻等症状。 4.儿茶素对糖尿病视网膜病变有一定的延缓其发展及治疗作用。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R774.1;R587.1

【参考文献】