噪声引起耳蜗血管纹损伤及其调控机制研究

发布时间：2018-04-14 06:37

  本文选题：噪声性聋 + 血-迷路屏障　； 参考：《中国人民解放军医学院》2017年硕士论文

【摘要】：噪声作为环境污染的一部分,对人们精神、心理及脏器系统带来不同程度的危害。最严重的是对听觉系统不可逆的损害。研究血管纹损伤分子机制为噪声性聋(NIHL)提供更有效的防治办法。耳蜗外侧壁包括有血管纹(SV)和螺旋韧带(SL),其中血管纹处的血-迷路屏障(BLB)对维持耳蜗内电位(EP)、调控内耳离子和体液平衡等具有重要作用。噪声引起的耳蜗血管纹血-迷路屏障(BLB)损伤是噪声性聋的重要影响因素之一。既往研究发现,血-迷路屏障除包含有微血管内皮细胞(ECs)和基膜(BM)外,还有周细胞(PCs)和血管周围巨噬细胞样黑色素细胞(PVM/Ms)的存在。PVM/Ms分泌色素上皮衍生因子(PEDF),具有抗血管新生、抗氧化、保护血管通透性的作用。血管内皮生长因子A (VEGFA)具有促进血管新生、增加血管通透性的作用。PEDF、VEGFA可通过调节细胞间连接蛋白的表达,调控BLB通透性。ZO-1、VE-Cadherin和Occludin是血管纹BLB中的连接蛋白,在维持BLB稳定性方面具有重要的作用。本实验在成功构建噪声性聋听阈永久性阈移动物模型的基础上,利用免疫荧光染色、耳蜗冰冻切片、血管纹铺片和激光共聚焦纤维成像扫描技术,对噪声暴露前后不同时间点耳蜗血管纹处PVM/Ms分布变化进行分析比较。观察到PVM/Ms荧光染色分布于耳蜗外侧壁、基底膜和螺旋缘,发现噪声暴露后急性期耳蜗PVM/Ms荧光染色分布减少。噪声暴露1天后PVM/Ms荧光染色分布率增加,5天达到峰值,14天恢复至噪声前水平。PVM/Ms可能通过分泌PEDF促进血管纹组织修复、拮抗血管内皮生长因子A (VEGFA)、抑制血-迷路屏障(BLB)通透性增加。为研究噪声引起的PEDF、VEGFA变化及PEDF、VEGFA对连接蛋白的影响作用,利用免疫印迹试验(Western blot)和实时荧光定量PCR (qPCR)技术对噪声暴露前后耳蜗外侧壁连接蛋白、色素上皮衍生因子(PEDF)、血管内皮生长因子A (VEGFA)及其受体VEGFR1、VEGFR2进行蛋白水平和mRNA水平的测试比较。发现噪声暴露后急性期 PEDF、VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、VE-Cadherin 和 ZO-1 表达下调,Occludin 表达上调。PEDF、ZO-1、VE-Cadherin噪声损伤急性期(NE)至噪声后7天(NE7d)表达上调达峰值,至第14天(NE14d)表达下调。VEGFA、VEGFR1、VEGFR2噪声后急性期(NE)至噪声后第2天(NE2d)表达上调达峰值,至第14天(NE14d)表达下调。Occludin噪声急性期(NE)至噪声后第2天(NE2d)下调并达最低值,随后表达上调。通过研究可得出结论,噪声急性损伤刺激PVM/Ms胞体缩小、足突回缩,PEDF与连接蛋白表达量降低,增加血管纹BLB的通透性。噪声损伤中期为修复噪声引起的血管纹损伤,PVM/Ms激活、增多;PEDF表达增加促进ZO-1、VE-Cadherin表达,促进血管纹BLB的修复。噪声损伤中期VEGFA表达量增加,修复受损的微血管内皮细胞,后期由于PEDF的桔抗作用,VEGFA表达量降低。VEGFA对ZO-1、VE-Cadher i n、Occlud i n具有抑制作用,在噪声损伤后期Occ l ud i n表达量增加进一步修复血管纹BLB。PEDF、VEGFA与连接蛋白间具有相互交叉的作用,根据我们的结果我们推断PEDF对ZO-1的抑制作用较VEGFA的促进作用明显,VEGFA对Occludin具有明显的抑制作用。研究噪声引起的PEDF、VEGFA、连接蛋白表达变化,为发现其分子调控机制提供了新的思路,为我们进一步研究噪声引起的血管纹损伤机制提供了方向。
[Abstract]:As a part of the noise pollution of the environment, to the spirit of the people, different degree of harm and organ system. Psychology is the most serious irreversible damage of auditory system. Study on the molecular mechanism of injury to vascular pattern noise deafness (NIHL) to provide more effective prevention measures. The outer side wall comprises a cochlear stria vascularis (SV) and spiral ligament (SL), the stria of blood labyrinth barrier (BLB) to maintain the endocochlear potential (EP), the regulation of inner ear ion and fluid balance plays an important role in the stria vascularis. Noise caused by blood labyrinth barrier (BLB) damage is one of the most important factors of noise induced hearing loss. Previous studies have found that the blood labyrinth barrier in addition to containing microvascular endothelial cells (ECs) and basement membrane (BM), and pericytes (PCs) and perivascular macrophage like melanoma cells (PVM/Ms) in the presence of.PVM/Ms secretion of pigment epithelium derived factor (PEDF), anti blood The new pipe, antioxidant, protective effect on vascular permeability. Vascular endothelial growth factor A (VEGFA) can promote angiogenesis, increase the role of.PEDF in vascular permeability, VEGFA may regulate intercellular junction protein expression and regulation of BLB.ZO-1 and Occludin VE-Cadherin permeability, connexin BLB in the stria vascularis, plays an important role in to maintain the stability of BLB. In this experiment the noise deafness threshold permanent threshold shift animal model successfully constructed, using immunofluorescence staining, cochlear frozen section, and confocal laser scanning imaging technology fiber stria paving, analysis and comparison of noise exposure at different time points before and after cochlea PVM/Ms distribution changes. Observed by PVM/Ms staining in the lateral wall of the cochlea, basilar membrane and spiral limbus, found in acute phase noise exposure after cochlear PVM/Ms staining decreased. The distribution of noise 1 days after exposure to PVM/Ms fluorescence staining rate increased, reached the peak at the 5 day, the 14 day return to noise level before.PVM/Ms may promote PEDF secretion by microvascular tissue repair, anti vascular endothelial growth factor A (VEGFA), inhibition of blood labyrinth barrier (BLB) permeability. To research the noise induced PEDF, VEGFA changes and PEDF, the effect of VEGFA on the effect of connexin, using Western blotting test (Western blot) and real time fluorescent quantitative PCR (qPCR) technology on the lateral wall of the cochlea after noise exposure with protein, pigment epithelium derived factor (PEDF), vascular endothelial growth factor A (VEGFA) and its receptor VEGFR1, VEGFR2 protein level and the level of mRNA test. Found that the acute phase of PEDF, VEGFA after the noise exposure of VEGFR1, VEGFR2, VE-Cadherin and ZO-1 expression, Occludin expression of.PEDF, ZO-1, VE-Cadherin acute phase noise injury (NE) after 7 to noise Day (NE7d) expression reaching peak at day fourteenth (NE14d) expression of.VEGFA, VEGFR1, VEGFR2 after the acute phase noise to noise (NE) after second days (NE2d) expression was up-regulated peak to fourteenth days (NE14d) expression of.Occludin in acute phase noise (NE) to NE2d (second days after noise down) and reached the minimum value, then expression. Through the study it can be concluded that acute injury noise stimulates PVM/Ms cell body shrinkage and podocyte retraction, PEDF and connexin expression decreased, increased vascular permeability of BLB. Grain noise damage caused by mid stria vascular damage, repair the noise of PVM/Ms activation, increased PEDF; the increased expression of ZO-1 VE-Cadherin expression, promote, promote the repair of BLB in stria vascularis. Noise damage metaphase VEGFA expression increase, microvascular endothelial cells to repair damaged, since the late PEDF antagonistic effect, reduce the expression of VEGFA.VEGFA on ZO-1 VE-Cadher i n, Occlud I, n Inhibition, increase further repair of BLB.PEDF in stria vascularis in noise damage l UD I late Occ n expression, VEGFA and has a cross connection between proteins, based on our results we conclude that the inhibitory effect of PEDF on ZO-1 VEGFA was promoted obviously, VEGFA has obvious inhibitory effect on Occludin. The noise caused by PEDF, VEGFA, connexin expression provides a new way to find the molecular regulation mechanism, provide a direction for us to further study the mechanism of vascular crack damage caused by noise.

【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R764

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